第四章 抗体制药（参考）.pptVIP

（五）单克隆抗体的大量制备 大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法和动物体内诱生法。体外培养法可获得浓度为10μg/ml的抗体，体内诱生法可获得浓度为5~20mg/ml的抗体，目前多采用动物体内诱生法，即利用BALB/c小鼠生产制备单克隆抗体。 （六）单克隆抗体的纯化 单克隆抗体的种类和亚类不同所需的纯化方式不同，所以在纯化之前必须明确其免疫球蛋白的种类和亚类，也可以根据用途不同选择合适的纯化方法。比如一些体外诊断试剂，对于抗体的去内毒素、病毒和核酸等微量的污染物要求不是很高，可以采用沉淀处理结合亲和层析或凝胶过滤的方法，而对于体内诊断和治疗用药则一定要除去微量的内毒素、病毒和核酸，采用亲和层析和阴离子交换层析处理。 动物体内诱生法制备的多克隆抗体的纯化一般流程为： 1.澄清和沉淀处理： 首先利用较低速离心的方法除去小鼠腹水内的红细胞、细胞碎块、纤维蛋白及脂质块等大块沉淀物，再利用高速离心除去残留的小颗粒物质；然后采用微孔滤膜过滤除去细菌、支原体和脂质，最后用饱和硫酸铵沉淀抗体，饱和硫酸铵能回收90%以上的单克隆抗体。 2.分离 主要分离方法有凝胶过滤、阴离子交换层析、亲和层析等。 (1)凝胶过滤，用于IgG和IgM类单克隆抗体的分离纯化。 (2)阴离子交换层析，用于IgG类单克隆抗体的分离纯化。 (3)亲和层析，层析柱中填充料多为蛋白A，适用于IgG类单克隆抗体的纯化。 生 物 技 术 制 药Biotechnological Pharmaceutics 第四章 抗 体 制 药 第一节 概念 一、抗原、抗体的概念及抗原抗体的关系 抗原：能刺激机体产生抗体，并能与抗体发生特异性结合的物质 称为抗原，物质所具有的这种特性称为抗原性。 抗体：B细胞与进入机体的抗原结合后，增殖分化为浆细胞，由 浆细胞合成并分泌的一类能与相应抗原特异性结合的含有 糖基的球蛋白称为抗体。 B细胞：B淋巴细胞的简称，是一种来自骨髓的干细胞，受抗原 刺激后会分化成浆细胞，合成和分泌免疫球蛋白，主要 执行机体的体液免疫。 免疫球蛋白：将具有抗体活性及化学结构，并且与抗体相似的 球蛋白统称为免疫球蛋白，英文缩写Ig，因结构 不同(重链）可分为5种，分别是IgG、IgM、IgA、 IgD、IgE。 抗体可以理解为能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白，抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白不都是抗体。 抗原和抗体的关系：抗原是引起机体产生免疫反应的主要外 因，决定免疫反应的特异性，机体和抗 原物质的斗争过程是机体排除异体物质 的保护性反应。没有抗原的刺激，机体 不能产生抗体；没有抗原，也无法检测 抗体的存在；同样，利用抗体也可以检 测抗原物质。 二、抗体的分子结构和功能 （一）结构 免疫球蛋白分子是由两条相同的重链（H链）和两条相同的轻链（L链）通过链间的二硫键连结而成的四肽链结构。以IgG为例，其分子由3个相同大小的节段组成，其中位于上端的两臂由易弯曲的铰链区连接到主干上形成一个“Y”形分子，此结构称为Ig分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本单位。 1.重链和轻链 免疫球蛋白重链的分子量约为55-75kDa，由450~550个氨基酸残基组成，不同的Ig含糖量不同，有4~5个链内二硫键。 免疫球蛋白的轻链的分子量约为25kDa，由约210个氨基酸残基构成，一般不含糖类，有两个由链内二硫键组成的肽环。轻链可分为两种类型——κ和λ，一个天然Ig分子上两条轻链的类型总是相同的，五种Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链，两种类型的轻链的功能无差异。 2.可变区和恒定区 通过分析不同免疫球蛋白的重链和轻链的氨基酸序列发现，重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，称为可变区（V区），而靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，称为恒定区（C区）。 （1）可变区