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研究内容之三：腺苷A2A受体对小移植肝缺血再灌注损伤保护作用及其机制的研究 小移植肝缺血再灌注损伤机制研究 A2A受体对小移植肝缺血再灌注后,氧化应激反应作用、炎性反应作用、细胞凋亡作用研究 A2A受体激活，可减轻小肝移植术后氧化应激反应,减少小移植肝内炎性因子的表达 A2A受体激活可降低小移植肝细胞凋亡，维持肝脏组织正常结构,可改善受体生存率 减体积肝移植大鼠的生存率低 移植早期肝细胞再生能力受损 移植后“小移植物综合征”（SFSS) 损伤机理 门静脉高灌注 缺血再灌注损伤 移植早期肝细胞的快速再生以及移植后肝功能支持是必须的。 研究内容之四：表达肝细胞生长因子的骨髓间充质干细胞保护大鼠小肝移植物的研究 立论依据 肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor, HGF） HGF具有促有丝分裂和细胞保护作用 HGF是最强的促肝细胞再生剂 HGF应用广泛 HGF的致命弱点：半衰期小于15min 解决方法：转基因 间充质干细胞（Mesenchymal stem cells, MSCs） MSCs为中胚层发育的早期细胞，具有多向分化潜能，可分化为肝细胞。 骨髓干细胞由于其取材方便，而成为研究的热点。 易于携带和表达外源基因。 体内外肝细胞来源的不同途径 研究内容之四：表达肝细胞生长因子的骨髓间充质干细胞保护大鼠小肝移植物的研究 肝再生通路与细胞周期 IL-6/STAT3通路 CDK2/cyclinD CDK4/cyclinE 炎症损伤 HO-1, ET-1，iNOS, Erg-1，HSP70 有关肝纤维化的一些指标：血清总胆红素和谷丙转氨酶水平；肝星形细胞α-平滑肌肌动蛋白(?-SMA)及其活化程度，检测肝脏胶原分布的相对含量：肝脏羟脯氨酸、层粘蛋白和透明质酸水平测定。 构建腺病毒载体重组子，体外感染骨髓间充质干细胞，获得稳定表达人HGF的HGF/MSCs HGF/MSCs移植后，实验组大鼠肝功能改善，肝再生加快，受体生存率提高 B A PS HGF/MSCs BrdU TUNEL H＆E ◆ * ◆ * ◆ * ◆ * C e a d b c f GFP+Alb GFP Alb PS HGF/MSCs a b d c B A GFP+Alb GFP Alb DAPI 转基因间充质干细胞改善小移植肝生存率的可能机制 1、早期通过HGF的作用，促进肝再生，提高生存率； 2、后期通过MSCs与HGF的协同作用，降低炎性反应，保持肝脏正常结构，预防移植肝纤维化 小结 1、在国内率先建立吻合肝动脉小移植肝模型，提供了较为符合活体肝移植临床实际的研究载体 2、采用选择性腺苷A2A受体激活剂，具有简单易操作的特点，显著减轻小移植肝损伤，为小移植肝保护措施的临床应用提供了切实可行的途径 小结 3、通常认为，缺血预处理具有保护移植物作用。本组在国际上首次提出，当移植肝体积小于30%时，缺血预处理可能会加重移植肝损伤。同时探讨基因转导和T调节细胞输注等多途径干预对小移植肝的影响。 4、在国际上首次将转肝细胞生长因子（HGF）基因的骨髓间充质干细胞移植应用于小移植肝保护，有效延长了小移植肝生存时间，为干细胞移植在小移植肝保护中的应用提供了新思路 成果发表于《Molecular Therapy》、 《Surgery》、 《Transpl Int》、《Transpl Immunol》国际著名SCI期刊，与香港、日本、欧美等国际上著名中心同类研究水平相近，达国际领先 干细胞在肝脏疾病领域的应用 自从1999 年和2000 年《科学》杂志连续两年将干细胞的研究评为年度世界十大科学成就以来,关于干细胞及其在临床上的应用等研究就蓬勃发展起来。 干细胞的定义 干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，即这些细胞可以通过细胞分裂维持自身细胞群的大小，同时又可以进一步分化成为各种不同的组织细胞，从而构成机体各种复杂的组织器官。 干细胞分类 干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。 胚胎干细胞(embryonic stem cells ,ESC) 是来源于人或动物胚胎内细胞团或原始生殖嵴的一种多能细胞系。胚胎干细胞几乎可以向所有的成年组织分化。 成体干细胞(adult stem cells , ASC) 存在于胎儿和成人各种组织及器官中,来源广泛, 是一类具有多向分化潜能的细胞群体,有横向分化(trans-differentiation) 能力。 胚胎干细胞和成体干细胞的特点 胚胎干细胞 更具有全能性,但涉及伦理问题，存在免疫排斥问 题；胚胎干细胞可能分化为肿瘤样的组织；在临床应用中受到取材困难等因素的