项目四-子项目3：外标法测定有机酸含量.ppt

任务3 外标法测定有机酸 液相色谱分析法模块之 完成有机酸含量的测定 能进行定性定量分析 能力目标 常用的方法是化学分析法、液相色谱法（内标法和外标法） 食品中常见的有机酸有柠檬酸、苹果酸、酒石酸、草酸、琥珀酸、乳酸及醋酸等。这些有机酸有的是食品原料中固有的，如水果蔬菜及其制品中的有机酸；有的是在食品加工中添加进去的，如汽水中的有机酸；有的是在生产加工贮存中产生的，如酸奶、食醋中的有机酸。 课程引入 本项目采用外标法测定有机酸酸的含量 样品的预处理技术 样品预处理的目的是消除基质干扰，保护仪器， 提高方法的准确度、精密度、选择性和灵敏度。预处理的过程一般包括： 提取 经典的方法有均质提取法、振荡提取法、索氏提取法等。 净化 比较传统的净化手段有液液萃取和固相萃取等应用的比较广泛。 测定过程演示1 配制流动相： 磷酸二氢钠缓冲液：取磷酸二氢钠6.80g，加水 880mL，振摇使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH＝6.30±0.05 把磷酸二氢钠缓冲液和甲醇以80∶20的比例混合，用0.45μm有机相滤膜减压过滤，脱气。 色谱分离条件： 色谱柱：C18色谱柱（5μm,4.6mm i.d.×250mm） 波长：254nm 流速：1.0mL·min-1。 。 测定过程演示2 标样及试样配制 有机酸标准品：精密称取0.01g有机酸对照品，置50mL容量瓶中，加30ml0.5%的氨水溶解，再用纯水定容至刻度。 有机酸试样：精确称量有机酸样品2g，研磨至均匀加入50ml的容量瓶中，加入30ml0.5%氨水，在热水浴中振摇20分钟，冷却后用纯水定容至刻度，摇匀，过滤。 打开检测器、高压泵的电源开关，按上述分离条件设置参数；打开排放阀，“purge”1-2分钟，关闭“purge”，使仪器在设定的条件下平衡。 打开工作站，设置分析方法。 等基线平衡后，用微量注射器量取定量环体积的3-5倍的有机酸标样，在上述分析条件下进样。 在相同的条件下，对有机酸样品进行测定，记录标样与样品的色谱峰面积和保留时间。 记录下样品名对应的文件名，同时打印出经优化的色谱图和 分析结果 测定过程演示3 有机酸的定性问题：一般可采用标准物质进行保留时间的对照来定性。 在标样和试样溶液的配制过程中，称量需采用减量法。 本项目中叶酸的定量采用外标法。 色谱柱的个体差异很大，即使是同一厂家的同种型号的色谱柱，性能也会有差异。因此，色谱条件（主要是指流动相的配比）应根据所用色谱柱的实际情况作适当的调整。 本项目的测定操作时要注意用电安全；同时配制氨水溶液应在通风柜中进行。 学生实训 要求每位学生独立完成，独立处理数据，合理安排时间。 外标法定量 外标法的特点：操作、计算简单，是一种常用的定量方法。它无需各组分都被检出、洗脱。但需要标样，标样及未知样品的测定条件要一致，进样体积要准确。 解： 分析中的污染 一般检测的环境、容器、试剂都是影响测定结果的因素。 容器 实验室常用的器皿有玻璃类、瓷类、石英类、塑料类等，在进行分析时，应按照待测样品的要求来选则器皿，不管使用哪种器皿，容器的洗条清洁都是很重要的，也是取得好的检测结果的基本保证。 试剂 在液相色谱分析中，所选用的试剂必须是色谱纯、优级纯或分析纯，如果用含量有杂质的试剂，则会出现杂峰而影响测定结果。 环境污染 仪器室的有害气体、气溶液、灰尘等等都能造成污染，影响检测结果，这种污染很难校正。因此，仪器室与其他实验室应隔离，保持清洁，仪器室内应安装空调，注意防潮、防腐、防震、空气相对湿度应小于70%为宜 仪器维护 仪器的性能影响到分析的结果，因此，我们要及时维护仪器。 贮液器 流动相在使用前都应用0.45μm的滤膜过滤，以保持贮液器的清洁；要定期清洗贮液器，以防滋长微生物。 高压输液泵 所用流动相或溶剂均过滤和脱气；开泵时应放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液；不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中 进样器 进样前应使样品混合均匀，无可溶解的污染物，以免堵塞六通阀；液相进样针应为平头针；每次工作结束后应冲洗整个系统；以防止缓冲盐和其它残留物留在进样系统中，。 色谱柱 ①在进样阀后加流路过滤器（0.5μm烧结不锈钢片），挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒。 ②在流路过滤器和分析柱之间加上“保护柱”，收集阻塞柱进口的来自样品的降低柱效能的化学“垃圾”。 ③色谱柱应在要求的pH值范围和柱温范围下使用，应使用不损坏柱的流动相。 ④进样前应将样品进行必要的净化，以免进样后对色谱柱造成损伤。 ⑤每次工作结束后，如果流动相是水和有机溶剂系列，则用流动相冲洗30分钟左右；如果流动相中含有盐溶液，则先用水-甲醇（90∶10） 然后再用纯甲醇冲洗20分钟并保存。 仪器维护 对本门课程进