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使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 进 行样品制备后使用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱和 Agilent Poroshell 120 液相色谱柱对虾中的激素进行测定应用报告食品作者 摘要Rongjie Fu 和 Andy Zhai 本研究开发了一种使用 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱和 Agilent 1290 Infinity 液安捷伦科技（上海）有限公司 相色谱测定虾中激素的方法。同时还开发并优化了一种使用 QuEChERS 提取虾中 13 种激中国上海浦东英伦路 412 号， 素的样品制备方法。结果表明，使用 QuEChERS 处理样品，后使用 Agilent Poroshell 120邮编 200131 EC-C18 色谱柱(3.0 mm × 100 mm, 2.7 μm)进行 HPLC 分析适用于虾中激素化合物的测定。13 个目标化合物完全分离，色谱图中没有显示其它干扰。方法回收率在 91.6% 到 107.2%之间，相对标准偏差(RSDs)在 0.15% 到 3.5 % 之间。前言尽管 QuEChERS 方法目前常用来消除植物源性食品中的基质干扰，如极性的有机酸、糖类和脂类，但同时它也有消除其它食品基质当前有一些激素和激素类物质能显著提高喂食动物的生长率和饲 如肉类和海产品中干扰的能力。基于食品基质和目标化合物的化料利用率。在一些国家，激素是一种常见的食品添加剂，同时认 学性质，为得到精密和准确的结果，有必要对原方法做一些修改。为在限量使用的情况下是安全的。尽管如此，长期摄入糖皮质激本文的目标就是扩展 QuEChERS 方法将其运用于海产品中兽药残素可能导致高血糖、骨质疏松、出生缺陷及免疫功能下降等后果。留的检测。使用 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 缓冲提取试剂其它激素如雌激素、雄激素和孕激素都具有致癌作用，能导致乳盒（部件号 5982-5650）和针对肉类药物残留的分散- SPE 15 mL腺癌、卵巢癌和细胞癌。因此在其它一些国家严禁上述物质的使试剂盒（部件号 5982-4956）分析虾中的 13 种激素（表 1）。对回用，尤其是雌激素。在之前的一篇应用报告中已描述了一种使用 收率和重现性进行了方法验证。Agilent Bond Elut OPT SPE 柱进行样品前处理，然后使用配备 使用全新开发的装填了 2.7 μm 表面多孔材料的 Agilent PoroshellAgilent ZORBAX Eclipse Plus C18，4.6 mm × 250 mm，5 μm 色 120 EC-C18 色谱柱用于这 13 种常见激素得分离。这种色谱柱与装谱柱的高效液相色谱法测定鲫鱼中激素的新方法[1]。填了亚 2 μm 全多孔材料色谱柱具有几乎同样的柱效，可用于快速和高分辨率分析。表 1. 本文中使用的激素序号化合物 CAS 号结构1 雌三醇 50-27-12 泼尼松 53-03-23 地塞米松 50-02-24 勃地酮 846-48-05 氢化可的松 50-23-72表 1. 本文中使用的激素（续 ）6 醋酸氟氢可的松 514-36-37 美雄酮 72-63-98 雌二醇 50-28-29 睾酮 58-22-010 甲睾酮 58-18-411 雌酮 53-16-712 己烯雌酚 56-53-113 己烷雌酚 84-16-23实验部分样品制备样品制备步骤包括样品均质、萃取/分配和分散 SPE 净化。试剂和化学品 将购于当地超市的虾洗净并切成小块。然后将虾块彻底粉碎均质，所有试剂和溶剂均为 HPLC 级或分析级。激素标准品购自 NICPBP 在 20 °C 下储存。称取 5 g ± 0.05 g 虾匀浆样品，置于 50 mL 离心（中国药品与生物制品检定所）。虾购自本地市场。管中。离心 30 s，将粘附于管内壁的样品离心到管底。每份样品在用甲醇制备标准储备液(1 mg/mL)并在冰箱中(–20 °C)储存。标准 需要时加入适量的 QC 加标溶液。然后涡旋样品 30 s，再分别加入储备液用甲醇稀释制得系列标准溶液。每周新配制标准溶液并于 5 mL 水，涡旋 10 s 混匀。然后每管加入 10 mL 乙腈。加盖并手动4 °C 以下保存。振摇 30 s。每管中加入 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 提取盐包（部件号 5982-5650）。盖紧离心管并剧烈振摇 1 min。在 4 °C 条仪器及材料件下以 4000 rpm 的速度离心 5 min。Agilent Bond Elut QuEChERS EN 提取试剂盒，部件号 5982-5650， 取 6 mL 上层乙腈溶液，转移至适用于