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nihouzi 05-04-2005 12:54 　　酶的活性中心内多为疏水环境，底物与酶反应常在酶分子的内部疏水环境中进行，疏水环境排斥了介于底物与酶分子之间的水膜，也消除了水分子对酶和底物功能基团的干扰，有利于底物与酶分子间的直接接触。 总之，一种酶的催化反应常常是多种催化机制的综合作用，这是酶促反应提高效率的原因。　　六、酶促反应动力学　　酶促反应动力学研究的是酶促反应速度及其影响因素，这些因素包括酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活物等。　　注意酶促反应动力学中的反应速度一般指反应刚开始的速度，即初速度。　　(一)底物浓度对反应速度的影响　　1.在其他因素不变情况下，底物浓度的变化对反应速度(统一用初速度来比较)的影响的作图呈矩形双曲线。在底物浓度较低时，?V随〔S〕?的增加而急剧上升，两者呈正比关系，因为此时尚有大量游离酶分子可被利用。随着底物浓度的增加，反应速度不再呈正比加速，因为此时酶已大部分与底物结合，所含游离酶不多，故随底物浓度的增加，可再利用的酶量有限，故反应速度增加的幅度下降。若继续增加底物浓度，反应速度不再上升，此时酶的活性中心已被底物饱和。　　为解释酶促反应〔S〕与V的关系，提出了著名的米氏方程式，即：V=Vmax[S]/Km+[S]　　当底物浓度很低时， Km＞〔S〕，分母〔S〕可不计，此时 V=Vmax[S]/Km,Vmax、Km对同一底物、同一酶、相同反应环境来说是一常数，故反应速度与底物浓度成正比。　　当底物浓度很高时， Km＜〔S〕，Km可不计，V=Vmax，反应速度达最大速度，再增加〔S〕?，也不影响反应速度。　　故从米氏方程中，即可看出底物浓度对反应速度的影响。　　2.?Km的含义：　　①Km是酶的特征常数，它只与酶的结构、酶所催化的底物和反应环境有关，与酶浓度无关。对于同一底物，不同两酶有不同的Km值，对于同一酶，不同底物也有不同的Km值。　　②由米氏方程，当V=1/2 Vmax时，可得?Km=〔S〕，由此可见，Km值表示酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。　　③1/Km可近似表示酶对底物亲和力的大小，1/Ｋm越大表示二者亲和力越大，表示不需要很高的底物浓度，便可得到最大反应速度，要注意的是只有在中间产物解离成反应物的速度大大超过其分解成产物速度时才适用。　　3.要求Km、Vmax，根据底物浓度对速度的矩形曲线求有很大难度，故将米氏方程要采取适当变换，作出直线图，方可更容易准确地求出Km、Vmax值，双倒数作图法是最常用的方法。将米氏方程取倒数：1/V=Km/Vmax*1/[S]+1/Vmax　　（二）酶浓度对反应速度的影响。　　在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶的浓度，使酶被底物饱和时，反应速度与酶的浓度变化成正比。很显然若底物浓度很小，酶的浓度本来就很大，再增加酶浓度，对促进反应没什么意义。所以我们研究酶浓度对反应速度的影响，一般不考虑这种情况。　　（三）温度对反应速度的影响　　酶是蛋白质，温度对酶促反应速度具有双重影响，温度升高一方面可加快反应速度，同时也增加酶的变性。故当温度升高到一定程度时，酶开始变性，反应速度也开始下降低。温度一般会使酶活性破坏，故生化实验中，要保持酶活性，常采用低温贮存，一些菌种也须低温保存。酶促反应速度最快时的环境温度称为酶促反应的最适温度。　　（四）pH对反应速度的影响　　酶活性受其反应环境的pH影响因为酶活性中心某些基团必须在某一解离状态，酶才会发挥最大催化活性，此外，底物也一样，在某一解离状态，才会与酶有最大亲和力，故需一定pH值，且不同的酶对pH有不同要求。酶活性最大时的pH为酶的最适pH值。　　（五）抑制剂对反应速度的影响　　能减弱或停止酶作用的物质称为酶的抑制剂。要注意的是必须不引起酶蛋白变性才可，某种物质使酶发生变性失活不属于抑制剂范畴。若抑制剂与酶结合牢固不能用简单的透析或超滤法去除，此类抑制剂为不可逆抑制剂；若用简单的透析和超滤法去除抑制剂，酶又重新表现原有活性的抑制剂称为可逆性抑制。　　1．不可逆抑制作用　　此类抑制剂通常以共价健与酶的活性中心上的必需基团相结合，使酶失活，根据抑制剂与酶结合的专一性，可分为专一性抑制剂和非专一性抑制剂。　　2．可逆抑制作用　　此类抑制剂通常以非共价键与酶或酶—底物复合物可逆性结合，使酶活性降低或消失。可逆性抑制作用的类型可分为以下三种：　　（1）竞争性抑制作用：竞争性抑制是在酶作用体系中有与酶的底物结构相似的物质存在，能与底物竞争与酶活性中心的结合，使有活性的酶数量减少。如磺胺类药物通过竞争性抑制二氢叶酸还原酶，干扰核酸合成，从而影响细菌生长繁殖，发挥其抑菌作用。只要［S］足够高，Vmax仍可达到，但此时需较高的［S］。故