重点试验室汇报[精选].ppt

植物远缘杂种和多倍化中的表观遗传研究 李锁平 一植物远缘杂交和多倍化中的遗传改变 1、亲本序列的快速消除和增加 研究表明，芸薹属，小麦属等植物在杂交和多倍化过程中，多倍体的基因组并不是双亲基因组的累加，而是表现出亲本的一些序列的快速消除和增加（消除是主要的）。Song等（1995）以人工新合成芸薹属异源多倍体F2—F5为材料，最早的报道了多倍体形成后伴随着广泛的快速的基因组变化，他用89 个核探针（19 个未知克隆, 63 个cDNA 克隆和7 个已知功能的核基因）分析了多倍体基因组限制性片段长度多态（RFLP）,发现F2--F5 各世代基因组均发生变化;其中包括亲本片段消失、出现亲本不存在的新片段、F2 未检测到的亲本片段在F5 重新出现等。 消除的涉及的序列有重复序列和低拷贝的非编码序列，也有编码序列。Feldm an 等（1997）最初用16个低拷贝非编码的探针进行了RFLP 研究, 其中9个探针在供试的二倍体基因组中都产生了强烈的杂交信号,但每个序列仅在异源四倍体的一个基因组中检测到了信号, 即两个亲本基因组之中的一个消失了,并且,伴随着六倍体小麦的形成, 又发生了新一轮的序列消除。在随后的实验中,Liu等（1998a）用同一套探针检测了Triticum 和Aegilops人工杂交合成的四倍体、六倍体、八倍体和十倍体中RFLP的情况,与前面的研究一致, 快速而非随机的序列消除在每个异源多倍体中都观察到了。为了进一步确认多倍化诱发的序列消除是否也发展到了编码序列,Liu等（1998b）又用分别定位在六倍体小麦42个染色体臂上的42个编码序列做探针,发现有片段的丢失或新片段的产生, 但是他们证实了这些变化是由于甲基化的影响而不是因为序列消除。这就说明在小麦中发生序列消除的多是低拷贝的非编码序列。编码序列主要进行了表观遗传修饰。 综合小麦属等物种的有关研究表明：在合成新的异源多倍体中的快速序列消除是普遍、非随机、有方向和高度可重复的事件，虽然有一些随机改变，但变化的方向是由双倍体的基因组组合决定的。序列消除不受亲本基因型和杂合性、细胞质背景和倍性水平的影响，也不是基因组间重组造成的（Ma等，2004）。 2、亲本基因组在多倍体中的累加 序列的快速消除并不是在所有物种多倍化过程中都发生。双倍体芥菜（B.rapaX B.nigra）真实的继承了双亲的基因组。Liu 等（2001）在棉花中利用扩增片段长度多态性分析（AFLP）和甲基化敏感多态性分析（MSAP）研究了新合成的棉属( Gossypium)异源四倍体、六倍体、双亲及多倍体自交后代的基因组,在AFLP 增的总共约22 000个基因组位点中,亲本的扩增带均能真实地传递给多倍体后代,多倍体基因组也未出现与亲本不同模式的甲基化;用5 个反转座子序列作探针的Southern 分析也显示异源多倍体基因组系2 个亲本基因组的忠实累加。新近Baumel 等（2001，2002） 采用反转座子间扩增多态性( IRAP)、反转座子-微卫星扩增多态性(REMAP) 及简单序列重复间隔( ISSR) 方法,比较了2 个亲本、杂种( Spartina × townsendii ) 及仅仅形成110年的年轻的多倍体大米草的基因组。结果显示大米草和杂种一代的基因组有很高的相似性,多倍体基因组系2个亲本基因组的精确累加。然而，在异源四倍体棉花上作的基因表达分析（Adams 等，2003）揭示相当比例高（25%）基因表达差异，人工合成的多倍体和自然多倍体基因表达谱累似表明重复基因表达谱差异是快速可重复的事件。这个结果表明棉花多倍体发生了直接的表观遗传学修饰而不是直接的遗传改变。 3、杂交和多倍化过程中的基因重排 植物多倍化过程中还会出现基因组的重排，在小麦、花生的远缘杂种和多倍体中均出现DNA重排（Levy，Feldman，2002；Liu等，2002；Wendel，2000；Burow等，2001）。在有些情况下,重排几乎涉及整个基因组,每条染色体也可能发生多次重排例如,多花黑麦草( Lolium multiflorum) 与牛尾草( Festucapratensis) 属间杂交合成的四倍体(2n = 4x = 28) 观察到基因组间广泛重组;GISH 分析了代表25 个不同F8 植株的72 个有丝分裂细胞,平均每个细胞发生22～38 次易位,至少涉及28 条染色体中的20 条,每条染色体易位0～7 次（Wendel，2000） 。基因重排有时会导致多倍体染色体数目的减少, 如苇状羊茅( Festucaarundinacea) 与多花黑麦草杂交后,染色体经秋水仙碱加倍,可育后代在减数分裂时出现有规律的配对,并表现出二倍体的染色数;GISH 分析显示二倍体的基因组是双亲染色体不同片断的重组体（We