动物性食品中单核细胞增生李斯特氏菌定量检测及制-内蒙古质监局.docVIP

前 言 本ISO 11290-1：1996/Amd.1：2004（E）的修订版《食品与动物饲料微生物学 单核细胞增生李斯特氏菌水平检测和计数方法 第1部分：检测方法》 ISO 11290-2：1998/Amd.1：2004（E）的修订版《食品与动物饲料微生物学 单核细胞增生李斯特氏菌水平检测和计数方法 第2部分：计数方法》ISO 6887-2：2003《食品和动物饲料的微生物学-用于微生物检验的试验样品、初始悬液和十倍制稀释液的制备 第2部分:肉及肉制品制备的特殊规则 考虑到我国进出口检验检疫的实际应用情况，对内容进行了，修改如下： 按照GB/T 1.1、GB/T 20000.2标准要求和汉语习惯对一些编排格式进行了修改； 将一些国际标准的表述方式改为适用于我国标准的表述方式； 本的附录A为规范性附录。 本部分主要起草单位：内蒙古出入境检验检疫局。 本部分主要起草人：王海艳敖威华赵林立。 本规定了用于本部分适用于。ISO 6887-1:1999 食品和动物饲料制品微生物学——用于微生物检验的样品、初始悬液和十倍制稀释液的制备——第1部分:初始悬液和十倍制稀释液制备的一般规则。ISO 7218 食品和动物饲料制品微生物学——微生物检验的一般规则。 ISO 17604 食品和动物饲料制品微生物学——用于微生物检验的胴体采样方法。培养基和试剂 Half Fraser肉汤：见附录A中A.1。 Fraser肉汤：见附录A中A.2。 李斯特氏菌显色培养基琼脂（ALOA）：见附录A中A.3。 牛津琼脂（OXA）：见附录A中A.4。 酵母浸膏胰酪大豆琼脂（TSA-YE）：见附录A中A.5。 酵母浸膏胰酪大豆肉汤（TSB-YE）：见附录A中A.6。 绵羊血琼脂：见附录A中A.7。 糖发酵培养基（木糖和鼠李糖）：见附录A中A.8。 动力培养基：见附录A中A.9。 协同溶血（CAMP）试验培养基和试验菌株：见附录A中A.10。 3 %过氧化氢（H2O2）溶液。 革兰氏染色液：见附录A中A.11。 引物：见附录A中A.12。 dNTP 混合物：dATP、dTTP、dGTP、dCTP各2.5 mM。 10×Taq Buffer。 Taq DNA 聚合酶。 琼脂糖（电泳级）。 溴化乙锭溶液：见附录A中A.13。 DNA分子量标记：100 bp DNA Ladder Marker。 50×电泳缓冲液：见附录A中A.14。 6×加样缓冲液：见附录A中A.15。 设备和材料 高压灭菌器。 恒温水浴箱：20℃±2℃，48℃±2℃。 恒温培养箱：25℃±1℃，30℃±1℃，36℃±1℃。 H计。 生物显微镜：100×，1000×。 均质器。 微量加样器：1 μL10 μL，100 μL，200 μL，1000 μL。 高速冷冻离心机：最大离心力在12000 g以上。 制冰机。 PCR仪。 凝胶电泳装置成像系统。李斯特氏菌标准菌株：单核细胞增生李斯特氏菌、西尔李斯特氏菌、绵羊李斯特氏菌、英诺克李斯特氏菌标准菌株和非李斯特菌属的标准菌株（如杆菌或链球菌）。 5.1 一般程序 5.1.1冷冻产品 冷冻保存的产品应在取样前解冻，如可以在1827℃条件下（实验室温度）解冻，最长不超过3 h，或者在2条件下解冻，最长不超过24 h。在取样后应尽快检测，参见ISO 6887-1:1999, 9.3。如果取样后产品仍然冻结，应加入一些室温条件下的稀释液以利于解冻。 坚硬、干燥产品 对于坚硬或干燥产品，用均质器均质时，每次的均质时间不应超过2.5 min。 对于坚硬、干燥或异质产品，必须切碎或磨碎实验室样品，为了防止温度过高，每次切割或研磨时间不超过1 min。 液态、非粘性产品 在检测前，为了确保微生物分布均匀，必须用手（如以25 cm的弧度摇动25次）以机械的方式摇动后再取检测样品。异质产品 对于异质产品（包括不同食品的碎片），取样时应将初产品中存在的每种成分都取到。也可以将整个实验室样品均质后取样以确保检测样品均一。 必要时需要切碎或磨碎实验室样品，为了防止温度过高，切割或研磨时间不要超过1 min。 特殊程序 等于或小于50 g的实验室样品 如果实验室样品的质量等于或小于50 g，就把样品全部用于初悬液的制备。 注：该制备方法仅用于同时对样品表面和深部微生物的检测和计数。 检测肉块或胴体 在深部或表面取样。 对于表面分析，应采用非破坏性技术（使用拭子或小布块）。参见ISO 17604。 肉或熟肉薄片或单一肉块 从中间取一条。 冷冻产品碎片或剃取物 充分均质。 带“皮”的肉产品 如果皮不能食用（合成的），将熟肠或生肠的渗透或非渗透性合成（塑料）皮在切开部位；用夹具将皮取掉。 将剁开的片断切碎。 速食品 对于包装的