流式细胞术的原理和临床一1课件.pptVIP

为减少自发荧光，应选用较亮的荧光染料，还应使用与荧光发射光谱相匹配的光学品质优良的滤片系统。利用较长波长的光线，如染料激光器的激光做为激发光源，也可减弱自发荧光。最后，对自发荧光还可用电子线路补偿的方法将自发荧光补偿掉。 细胞群体的DNA直方图 流式细胞计测量的结果可为一数字矩阵，此矩阵可用一个或数个图形来表示。下面我们讨论一下，一个细胞群体的DNA直方图的图形。 设一个指数生长的细胞群体全部细胞都处于增殖状态，用细胞动力学的语言说，就是增殖比是1。细胞群体经染色后,由于每个细胞结合的染料与DNA含量成正比。由于G1期细胞的DNA含量为2C，G2和M期细胞DNA含量为4C，S期细胞的DNA含量在2C—4C之间。 于是，从理论上说，这样一个群体的DNA直方图应该是：即G1期细胞全体都在同一荧光道上63道，G2和M期细胞则位于2*63=126道处，S期细胞位于63—126道之间，由于DNA合成速率不是均一的，因而在这一段范围内不会是均匀分布。 细胞周期和DNA分布直方图 A细胞周期 B DNA直方图的理论分布 C 实际的DNA直方图 流式细胞仪的技术指标 1.荧光分辨率 是表明仪器测量所能达到的最大精度，通常用变异系数表示。显然它与被其测定的标准样品有关。 2.荧光灵敏度 以能检测到最少的FITC分子来表示，即微球上最少标有多少个FITC分子时刚好能被检测到，即定