- 1、本文档共11页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
PTEN表达载体的构建及转染食管鳞癌细胞系EC9706
PTEN表达载体的构建及转染食管鳞癌细胞系EC9706
作者:侯桂琴,鲁照明,薛乐勋,田芳,范天黎,刘兰琦,许培荣 作者单位:450052 郑州大学细胞生物研究室,郑州大学第一附属医院
【摘要】 目的 筛选稳定表达野生型PTEN基因的食管鳞癌细胞株EC9706。方法 提取胎盘总RNA,设计引物,PCR扩增人野生型PTEN基因,经测序鉴定后,连接于pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建pcDNA3.1PTEN,用脂质体介导的方法将其转染EC9706。而后加抗生素G418筛选稳定表达株,用RTPCR方法检测稳定表达株PTEN基因的mRNA水平,通过绘制生长曲线观察细胞生长情况。结果 PCR产物的电泳结果显示,在1 500bp左右有一明显亮带,测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致;稳定表达PTEN基因的细胞株RTPCR结果显示,PTEN的mRNA水平比对照细胞株相比明显升高;生长曲线结果显示,转染后的细胞生长速度明显减慢。结论 所扩基因为野生型PTEN基因,所构建的载体为野生型PTEN基因真核表达载体,并筛选出PTEN基因稳定表达的食管鳞癌细胞株。
【关键词】 PTEN;食管鳞癌;mTOR;转染
基金项目:教育部十五211工程重点学科建设项目(教重字[2002]第2号)
Construction of a Vector for Stable Expression of PTEN in Esophageal Squamous Cell Cancer Cell Line
HOU Guiqin,LU Zhaoming,XUE Lexun,TIAN Fang,FAN Tianli,LIU Lanqi,XU Peirong
Laboratory for Cell Biology,The First Affiliated Hospital, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052,China
Corresponding Author:XUE Lexun,Email:lxxue@
Abstract:Objective To establish stable expression cell line transfected with eukaryotic expression vector of PTEN. Methods To clone the wildtype PTEN gene, total RNA was isolated from human placenta tissues. A cDNA of human PTEN was obtained by optimized RTPCR and sequenced, and then the cDNA fragment was put into the eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1(+) to construct pcDNA3.1PTEN. Cells of esophageal squamous cell cancer cell line EC9706 were transferred with pcDNA3.1PTEN using lipofectamine. The stable expression cells were screened by G418. RTPCR and growth curve were done for identifying the screened cells. Results The cDNA fragment produced by RTPCR had 100% homology with wildtype PTEN gene sequence on GenBank by BLAST. The mRNA level of PTEN increased notably in the cell line we screened, and the growth of the cell line was very solely compared with control cell lines. Conclusion Because of cells of esophageal squamous cell cancer which stably express PTEN were successfully screened, it is concluded that a PTEN eukaryotic vector for
您可能关注的文档
- ps处理脸部的斑纹.doc
- PS利用【匹配颜色】和【颜色查找】调色技巧.doc
- PS图像处理.doc
- PS多图合成精美的非主流图片.doc
- PS如何利用水之语插件制造梦幻效果.doc
- PS彩色景观平面图制作技巧.doc
- PS将白天变成逼真的夜晚效果.doc
- ps总平面的做法.doc
- PS快速技巧将皮肤变光滑而又不失去皮肤的纹理.doc
- PS技巧风光摄影中的渐变灰滤镜处理.doc
- 北师大版小学数学三年级上册《寄书》教学设计.docx
- 统编版(部编版)语文二年级上册《雪孩子》教学设计.docx
- 统编版(部编版)语文二年级上册《八角楼上》教学设计.docx
- 北师大版小学数学三年级上册《长方形周长》教学设计.docx
- 北师大版小学数学三年级上册《丰收了》教学设计.docx
- 统编版(部编版)语文二年级上册《夜宿山寺》教学设计.docx
- 统编版(部编版)语文二年级上册《风娃娃》教学设计.docx
- 统编版(部编版)语文二年级上册《朱德的扁担》教学设计.docx
- 统编版(部编版)语文二年级上册《难忘的泼水节》教学设计.docx
- 统编版(部编版)语文二年级上册《纸船和风筝》教学设计.docx
文档评论(0)