高中生物选修一速简笔记.docVIP

高中化学选修1速简笔记 适于加强记忆，配套课本使用 5.1 DNA粗提取、鉴定 1．1）DNA在0.1mol/LNaCl溶液中溶解度最大，2mol/L溶解度最小。 DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白质能溶，进一步分离。 2）DNA在80oC以上变性，多数蛋白质不能忍受60~80oC。 洗涤剂瓦解细胞膜，对DNA无影响；蛋白酶水解蛋白质。 3）DNA、二苯胺，沸水浴，蓝色。 2．1）选取：DNA含量较高的生物组织。 2）动物：加蒸馏水，搅拌，过滤，收集滤液。 植物：切碎，加洗涤剂、食盐，搅拌研磨，过滤，收集滤液。 3）纯化DNA：①控制NaCl浓度：2mol/L，过滤不溶物质，0.14mol/L，析出DNA，过滤溶液中杂质，2mol/L，溶解DNA。直到丝状物不再增加为止。 ②滤液中加嫩肉粉，木瓜蛋白酶。 ③滤液60~75oC恒温水浴箱保温，严格控制温度范围。 4）析出鉴定：过滤，加与滤液体积相等、冷却的95%酒精溶液，静置，白色丝状物。 用玻璃棒沿一个方向搅拌卷起，滤纸吸去水分。 2mol/LNaCl溶液溶解，二苯胺试剂，混合均匀，沸水加热，冷却，变蓝。 3．1）血液，加柠檬酸钠，防止凝固。 2）加洗涤剂时，轻缓、柔和，否则容易产生大量泡沫。 加入酒精、搅拌，以免加剧DNA分子破裂，不能形成絮状沉淀。 3）二苯胺试剂现配现用：溶于冰醋酸，加浓硫酸，棕色瓶保存，临用前加2%乙醛溶液。 4）提取高纯度DNA，CTAB、SDS、吐温。 4．1）蒸馏水使鸡血细胞破裂：低渗液体，水分进入细胞胀破，搅拌加速细胞膜、核膜破裂。 2）洗涤剂：离子去污剂，溶解细胞膜，有利于DNA释放。 食盐：有利于DNA溶解。尼龙布过滤。 3）研磨目的：破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCl溶液中。 不充分：DNA提取量减少，导致看不到鉴定效果。 4）滤液中含核蛋白多糖、RNA。 5）反复溶解析出DNA：能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 6）方案原理：一DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 二蛋白酶分解蛋白质，三蛋白质、DNA变性温度不同。 5.2 多聚酶链式反应 1．1）分析细胞内参与DNA复制的各种组成成分与反应条件。 2）DNA羟基末端3′端，磷酸基团末端5′端，DNA合成方向：从子链5′端向3′端延伸。 3）变性：80~100oC双链解体。 4）条件：DNA模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、TaqDNA聚合酶、控制温度反复进行。 5）一般经历三十多次循环，步骤：94oC变性、55oC复性、72oC延伸。 6）循环之前进行一次预变性，增加大分子模板DNA彻底变性的概率。 7）两种引物使DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。 8）微量离心管，0.5mL，微量移液器，PCR仪或三个恒温水浴锅来回转移。 2．1）使用前高压灭菌，避免外源DNA因素的污染。 2）缓冲液和酶分装，-20oC储存，使用前在冰块上缓慢融化。 3）每吸取一次，移液器枪头必须更换。盖严离心管后，用手指轻轻弹击侧壁，使混合均匀。 离心机，使反应液集中在离心管底部。 4）DNA在260nm紫外线波段有一强烈吸收峰。DNA含量鉴定： 50倍稀释，蒸馏水对照，波长260nm处，紫外分光光度计读数调零，加入比色杯中，测定光吸收值，计算含量：（50：标准厚度1cm比色杯中，OD206为1相当于50μg/mL双链DNA） DNA含量（μg/mL）=50 × 读数 × 稀释倍数 5）PCR突出优点：快速、高效、灵活、易于操作。 5.3 血红蛋白的提取和分离 1．1）凝胶色谱法：分离蛋白质，相对分子质量，凝胶，多孔球体，多糖类化合物，葡聚糖、琼脂糖，较小的易进入通道，路程长，速度慢，较大的在外部移动，短，快。洗脱。 2）一定范围内，缓冲溶液，维持PH基本不变，1~2种缓冲剂溶解于水，调节使用比例。 体外溶液PH与体内基本一致。 3）电泳，带电粒子在电场作用下发生迁移。生物大分子一定PH下带上正负电。 向着与所带电荷相反的电极移动。带电性质不同、分子大小、形状不同，产生不同迁移速度。 4）琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定蛋白质分子量，SDS-聚丙烯酰胺电泳。 迁移率取决于所带净电荷的多少以及分子的大小。加入SDS，消除净电荷对迁移率的影响，使蛋白质发生完全变性，解聚成单条。测定结果只是单条肽链的分子量。 SDS负电荷大大超过原有分子量，电泳迁移率完全取决于分子大小。 2．蛋白质的提取和分离：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。 1）血液中90%是血红蛋白，四条肽链，两条α-肽链、两条β-肽链。 每条环绕一个亚铁血红素集团，携带一分子氧或二氧化碳，含有血红素呈红色。 2）红细胞洗涤：去除杂蛋白，有利于分离纯化。 采集的血样及时分离红细胞，低速短时间离心