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免疫扩散和免疫电泳技术 Immuno-diffusion and Immuno- electrorphoresis 概 要 免疫分析是利用抗体和抗原可以在琼脂或琼脂糖介质中扩散、泳动等反应特征进行的.由于其特异性强,分辨率高,因此应用较普遍.尤其是新的免疫分析手段的应用如:亲和免疫电泳,电聚焦免疫电泳,放射免疫电泳和固相免疫吸附等.在更短的时间内使灵敏度更高，分辨率更强,应用范围更宽的分析、鉴定技术. 抗原、抗体反应机制 可溶性抗原与抗体在溶液或凝胶中接触可形成肉眼可见的抗原—抗体复合物沉淀,亦称免疫沉淀反应.沉淀形成的主要原因是抗原抗体分子表面的疏水基团相互接近而有效的排出他们之间的水分子. 免疫复合物形成的步骤 抗原抗体的特异性结合受抗原抗体分子间的范德华力、氢键、疏水基团与亲水基团之间的相互作用力的影响; 形成肉眼可见的免疫复合物晶格,其决定因素包括抗原与抗体的比例、分子量大小,盐浓度,反应温度、抗原抗体的绝对浓度及抗原抗体反应的亲和力等因素. 利用这一特征,可用已知抗原(抗体)检测未知抗体(抗原)的存在及其含量,达到诊断疾病的目的. 第一节 基本原理 如果一种外来物质，如一种蛋白质，一种细菌或一种病毒进入到动物组织中，动物将产生抗体对付这种外来物质。这种外来物质统称抗原。它可以被注射到动物体内以产生抗体。 抗原决定簇是抗原结合抗体的部位。 一个抗原能有一个或多个抗原决定簇。 每一个抗原决定簇专一地结合在不同的抗体结合部位。 抗原分子在抗体分子之间起着桥的作用，在抗原与抗体之间形成链或网（通常称为免疫沉淀） 抗体是一组蛋白，总称免疫球蛋白。 一个免疫球蛋白分子有四条多肽链组成。 特异地与抗原结合的抗体结合部分称为结合部位。 一个抗体分子有两个结合部位，能结合一个或两个抗原分子。 第二节 抗原抗体反应 凝集反应 直接凝集反应， 间接凝集反应 免疫扩散 免疫电泳 微量多槽免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳 交叉免疫电泳 亲和免疫电泳 一.凝集反应 1.直接凝集反应 2.间接凝集反应 2.间接凝集反应 二.免疫扩散 1.单向免疫扩散： 是指抗原抗体两种成份中只有一种成份扩散的方法。一般可分为试管法和平板法。应用于抗原定量技术。 2.双向免疫扩散 双免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。每一对抗原抗体系统只形成一条沉淀线，多个对应系统即形成多条沉淀线。用于 ①鉴定抗原、抗体的亲缘关系； ②若干种抗原之间的相关性； ③检测抗体的效价。 双向扩散 血清学研究表明pfDNV是细小病毒科浓核病毒亚科的一个新成员 第三节 免疫电泳 免疫电泳是指一定量可溶性的抗原物质与相应抗体借用琼脂糖为载体在一定的电场强度下以合适的比例加速形成复合物，并以沉淀线或峰的形式表现出来，通过观察和分析沉淀线或峰的性质对抗原、抗体进行定性、定量。 免疫电泳包括： 微量免疫电泳; 火箭免疫电泳; 交叉免疫电泳; 亲和免疫电泳。 一.微量免疫电泳 原理：在凝胶介质中将区带电泳与免疫双扩散相结合的一种免疫化学方法。提高分辨率和灵敏度，能比较理想的分离和鉴定蛋白质混合物。 方法：将测试的血清样品在琼脂糖平板上电泳，各种免疫球蛋白的分子量大小及电荷状态不同，泳动率不同而各自分离，然后在电泳轴的平行挖一长槽，加入抗血清或特异性抗体，抗原与相应的抗体扩散相遇，出现沉淀弧，根据各蛋白所处的电泳位置，将其分离与鉴定。 二.对流免疫电泳 原理:是外加电场以限制抗原和抗体在琼脂介质中的自由扩散，提高抗原、抗体的局部浓度，加快二者的移动速度，是快速、灵敏的免疫学检测方法。 阴极端的血清抗原在PH（8.6）值下，带负电荷，故在电场中抗原向正极泳动；抗体的PI（8.2），接近PH（8.6）,带负电荷量极少 ,在同样电场作用力时,几乎不泳动;可以借用电渗力的作用进行分析. 原理:琼脂凝胶的由正极向负极的电渗作用大,超过了泳动力若将抗体加在阳极端,电渗力使之向负极泳动，因此，在合适的抗原、抗体比例及一定的离子强度下二者相遇对流而形成复合物沉淀线。可以进行抗原、抗体的定性与定量分析。 三.火箭免疫电泳（单向定量免疫电泳） 原理：在琼脂糖凝胶板内掺入适量的抗体，在电场作用下，定量的抗原泳动时，遇到琼脂内的抗体，形成抗原—抗体复合物沉淀出来。在抗原孔内，走在后面的抗原继续在电场中向正极泳动，在向前泳动的过程中，遇到了琼脂内的抗原—抗体复合物，抗原的增加，过量使复合