国内外标准测定依达拉奉注射液含量结果的对比研究.docVIP

国内外标准测定依达拉奉注射液含量结果的对比研究 　　【摘要】目的验证国内标准测定依达拉奉注射液中依达拉奉含量与日本标准的一致性, 确定国内标准的可行性。方法采用高效液相色谱法按照日本标准(内标法)和国内标准(外标法)分别测定含量。结果国内外两个标准测定同一厂家三批依达拉奉注射液中依达拉奉的平均含量分别为95.0%、(RSD为0.122%)和98.2%(RSD为0.305%)。结论国内外两个标准含量测定结果一致, 差异无统计学意义。 　　【关键词】依达拉奉注射液；高效液相色谱法；含量测定依达拉奉注射液是日本三菱东京制药株式会社开发的中枢神经系统用药, 于2001年在日本首次上市, 随后国内多家企业相继上市仿制药。在质量标准的含量测定项下, 国内外标准均采用高效液相色谱法, 但日本标准采用的是内标法, 国内标准采用的是外标法, 为了比较国内外标准测定依达拉奉注射液中依达拉奉含量结果的一致性, 我们按照日本标准和国内标准分别对同一厂家的三批依达拉奉注射液中依达拉奉的含量进行了测定, 以其确定国内标准的可行性。 　　1仪器与试药 　　1. 1主要仪器Agilent 1200高效液相色谱仪(Agilent 1200可变波长检测器(VWD), Agilent 1200数据站, P/N-7725i手动进样器, G1354A四元梯度泵及G1316A柱温箱(美国Agilent公司产品)。 　　1. 2主要试药依达拉奉对照品(南通飞宇生物科技有限公司, 批号F 规格：100mg, 含量≥99%)；依达拉奉注射液(吉林省某药业股份有限公司：2013063001、2013063002、2013063003)；甲醇(美国Fisher公司, 色谱纯)；醋酸铵(北京化工厂, 分析纯)；乙腈(美国Fisher公司, 色谱纯)；醋酸(北京化工厂, 分析纯)；氨水(北京化工厂, 分析纯)；对氨基苯甲酸乙酯(阿拉丁化学试剂上海有限公司, 分析纯)。 　　2方法与结果 　　2. 1色谱条件 　　2. 1. 1国内标准［1］Kromasil5~C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相为0.05 mol/L醋酸铵溶液(用冰醋酸调节pH= 4.0±0.1)-乙腈(75:25)；流速1.0 ml/min；柱温25℃；检测波长254 nm；进样量20 μl。 　　对照品溶液的制备：取依达拉奉对照品适量, 精密称定, 加流动相溶解并稀释制成每毫升中约含依达拉奉20 μg的溶液。 　　供试品溶液的制备：精密量取依达拉奉注射液0.70 ml, 加流动相稀释至50 ml。 　　2. 1. 2日本标准［2］Kromasil5-C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相为稀乙酸(1→100)-甲醇(3:1)加入氨试液调节pH至5.5；流速1.5 ml/min；柱温50℃；检测波长240 nm；进样量20 μl。 　　对照品溶液的制备：取依达拉奉对照品适量, 精密称定, 加内标溶液2.50 ml, 用甲醇稀释至50 ml。 　　供试品溶液的制备：精密量取依达拉奉注射液0.50 ml, 加内标溶液2.50 ml, 用甲醇稀释至50 ml。 　　内标溶液的制备：精密称定氨基苯甲酸乙酯约0.5 g, 用甲醇稀释至250 ml。 　　2. 1. 3系统适用性试验在上述色谱条件下, 分别精密量取依达拉奉对照品和供试品溶液各20 μl注入液相色谱仪, 理论板数以依达拉奉峰计算分别为2552(国内标准)和5436(日本标准)。 　　2. 2含量测定方法 　　2. 2. 1国内标准精密量取依达拉奉对照品及供试品溶液各20μl注入液相色谱仪, 记录色谱图, 按外标法以峰面积计算依达拉奉注射液中依达拉奉的含量。 　　2. 2. 2日本标准取本品适量, 约相当于依达拉奉3 mg, 精密加入对氨基苯甲酸乙酯溶液10 ml, 加甲醇稀释至20 ml, 作为供试品溶液；取依达拉奉对照品75 mg, 精密称定, 用甲醇定量稀释至50 ml量瓶中, 精密量取2 ml, 精密加入内标溶液10 ml, 加甲醇稀释至20 ml, 作为对照品溶液。取供试品和对照品溶液各2 μl, 注入液相色谱仪, 以峰面积计算。 　　2. 3结果 　　2. 3. 1国内标准 　　2. 3. 1. 1线性试验精密称定干燥至恒重的依达拉奉对照品适量, 加流动相制成990 μg/ml的贮备液, 分别精密量取上述贮备液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml置50 ml容量瓶中, 加流动相稀释至刻度。精密量取上述溶液20 μl, 注入液相色谱仪, 记录色谱图及峰面积。以溶液浓度(X)为横坐标, 相应峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归, 得回归方程Y