耳针、中药对衰老大鼠海马神经元NGF、BDNF蛋白表达的影响.docVIP

耳针、中药对衰老大鼠海马神经元NGF、BDNF蛋白表达的影响 　　摘要：目的：通过观测耳针、六味地黄丸加味丹参对D-半乳糖衰老大鼠海马组织神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的蛋白表达的影响，探讨耳针、六味地黄丸加味丹参预防和延缓衰老的可能机理，为耳针、中药延缓衰老在临床上的运用提供新的理论和实验依据。结果：：1、耳针组、中药组、耳针+中药组海马组织NGF蛋白表达增加，与模型组相比较，差异具有显著性（P0.05）。2、耳针组、中药组、耳针+中药组海马组织BDNF蛋白表达增加，与模型组相比较，差异具有显著性（P0.05）。结论：耳针、中药具有延缓衰老的作用，从神经内分泌角度看，其可能的作用机理是：耳针、中药促进内源性神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的表达，发挥其营养、支持、保护神经细胞、抑制细胞凋亡的作用，从而调节神经内分泌系统功能最终达到延缓衰老的目的。 　　关键词：衰老； 耳针；中药； 海马； 神经生长因子； 脑源性神经营养因子 　　【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0071-02目前全球都面临人口老龄化问题，老年人口的增多带来了一系列社会和经济问题。因此，对衰老机制和延缓衰老的研究日益受到重视，其中神经系统的老龄性退行性变化引起的疾病，如老年痴呆、帕金森病等已成为医学领域中研究的热点，受到普遍关注。本研究采用D-半乳糖致衰老的方法复制衰老大鼠模型，以海马神经元神经营养素家族成员神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的表达以及雌鼠血清非肽类神经生长因子雌激素（E2）的含量作为检测指标，探讨耳针、中药预防和延缓衰老的可能途径，探索其延缓衰老作用的新机制，为耳针、中药延缓衰老在临床上的运用提供新的理论和实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料： 　　1.1.1 动物：Wistar健康大鼠70只，清洁级，雌雄各半，双耳无缺损，3～4月龄，体重250～300g（由贵阳医学院实验动物中心提供），造模前在相同光照条件大鼠适应性喂养1周，雌雄分开，自由摄取标准饲料（由贵阳医学院实验动物中心提供），饮用干净自来水，室温控制在15～18℃之间，湿度70%左右。 　　1.1.2 主要试剂和仪器：六味地黄丸：贵阳德昌祥药业有限公司；丹参：贵阳阜康堂药业公司；SOD试剂盒：南京建成生物工程有限公司；MDA试剂盒：南京建成生物工程有限公司 　　BDNF免疫组化试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司；NGF免疫组化试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司；揿针（耳针）：北京环亚医药器械公司；台式高速离心机：上海医用分析仪器厂。 　　1.2 方法 　　1.2.1 实验动物分组：70只 Wistar健康大鼠随机分为5组，每组14只（雌雄各半，分开饲养），即对照组、模型组、耳针组、中药组、耳针+中药组。 　　1.2.2 动物模型建立[1]：Wistar大鼠适应性喂养1周后，采用国际上公认的D-半乳糖复制衰老模型。6周后，取大鼠静脉血测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。模型组与对照组比较，模型组SOD活性明显降低，MDA含量明显增高（见表1、2），证明模型复制成功。 　　1.3 治疗方法 　　1.3.1 耳针组：在造模同时进行耳针治疗，根据华兴邦《实验动物与动物实验》中及林文注[2] 、李辞蓉[3]所介绍的动物穴位定位，选取大鼠双侧耳穴（肾穴、脾穴、肝穴）以揿针按压后固定留置于耳上。 　　1.3.2 中药组：在造模同时每日给予六味地黄丸（由熟地、山药、山萸肉、茯苓、泽泻、牡丹皮组成）加丹参磨制成中药粉末，每只大鼠每日按成人剂量的10倍给药，拌入饲料后混匀，自由摄食。 　　1.3.3 耳针+中药组：造模同时进行耳针+中药治疗，取穴及中药喂服方法同前。以上治疗时间均为6周[1]。 　　1.4 指标及检测 　　1.4.1 血清SOD、MDA的检测 　　血清SOD、MDA的检测均按试剂盒说明书操作。SOD的活性采用黄嘌呤氧化酶法检测； MDA的含量采用硫代巴比妥酸（TAB）法检测。 　　1.4.2 NGF、BDNF的免疫组织化学染色， 　　1.4.3 免疫组化染色阳性结果判断：阳性信号主要位于胞浆内，呈棕黄色或黄色者为阳性细胞。 　　1.4.4 数据处理及图像分析：数据采用SPSS12.0统计软件进行储存、整理、分析，各项指标采用均数±标准差表示，组间数据采用单因素方差分析及q检验。 　　图像资料采用贵阳医学院病理科Biomias99图像分析系统。取视场面积443268um2，每张切片在显微镜的10×40倍目镜下随机选5个视场，通过摄像头采集图像进入Biomias99图像分析系统，每个视场