咪唑斯汀对小鼠接触性皮炎的治疗作用及机制讨论.docVIP

咪唑斯汀对小鼠接触性皮炎的治疗作用及机制讨论 　　反应性接触性皮炎( allergic contact dermatitis，ACD ) 是由抗原特异性T 细胞介导的皮肤过敏性疾病，通常是由皮肤直接接触化学物质所致。随着社会经济的发展，ACD 逐渐成为一种普遍的职业病。大量研究表明多种细胞因子，如IFN - gamma;、IL -2、IL - 4 在ACD 的发病中其重要作用。咪唑斯汀是一种特异性外周组胺H 1受体拮抗剂，临床上常用于荨麻疹的治疗。另有报道显示，咪唑斯汀还具有抗过敏、抗炎作用。为进一步证实其抗炎作用，本研究采用DNFB 建立小鼠ACD 模型，观察咪唑斯汀对其的疗效并探究其可能机制。 　　1 材料 　　1. 1 实验动物SPF 级雄性昆明小鼠( 购于湖北省疾控中心实验动物中心) 40 只，体重( 30 plusmn; 5) g。饲养于室温22 ～ 25 ℃，相对湿度40% ～ 50%环境下，混合饲料喂养，自由饮水。 　　1. 2 主要药品与试剂咪唑斯汀原料( 西安杨森制药有限公司) 用5% 羧甲基纤维素钠配制成0. 33g·L - 1混悬液，醋酸地塞米松原料( 天津力生制药有限公司) 用5%羧甲基纤维素钠配制成0. 025 g·L - 1混悬液，DNFB ( Sigma 公司) 配制成0. 2% 及0. 5%的丙酮溶液。TNF - alpha; 酶联免疫试剂盒( 美国Cayman 公司) ， IL - 4、IL - 12 酶联免疫试剂盒( 武汉博士德生物工程有限公司) 。 　　2 方法 　　2. 1 ACD 模型建立将40 只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、咪唑斯汀组和醋酸地塞米松组四组，每组10 只。实验小鼠喂养2 周后，腹部同一部位除毛，暴露皮肤; 实验第1 天和第2 天于去毛部位涂抹0. 5% DNFB 溶液25 mu;L 各致敏一次。第6 天在小鼠背部右侧选取3 cm times; 2 cm 区域除毛，涂抹0. 2% DNFB 25 mu;L 激发。左侧3 cm times; 2 cm 剃毛区域为对照。在致敏前1 天开始，咪唑斯汀组和醋酸地塞米松组按3. 33 mg ·kg - 1 和0. 25 mg·kg - 1剂量灌药，每天1 次，连续5 d。激发后立即灌药，1次/d，连续灌药3 d。 　　2. 2 皮肤厚度及肿胀度测定激发皮炎24 h 和72h 后，剪取背部右侧及对称左侧皮肤，用电子游标卡尺测量皮肤厚度，测量3 次，取平均值; 然后用直径6 mm 圆形打孔器打取两侧相同面积皮肤，称重，计算对应的皮肤肿胀度。计算公式: 皮肤肿胀度=( 炎症区域皮肤重量- 健康区域皮肤重量) /健康区域皮肤重量times; 100 %。 　　2. 3 Elisa 法测定小鼠血清及皮肤组织TNF - alpha;，IL -4，IL -12 水平激发皮炎24 h 和72 h 后，分别处死各组小鼠5 只，摘取眼球取血，4℃静置过夜后12 000 r·min - 1 离心，分离血清，皮肤组织匀浆后测定蛋白浓度，严格按照Elisa 试剂盒说明书方法测定血清及皮肤组织上清液中细胞因子TNF -alpha;， IL - 4， IL - 6， IL - 12 水平。 　　2. 4 统计学方法各组数据以x plusmn; s 表示，实验数据用SPSS 13. 0 统计软件进行分析处理，组间比较采用LSD - t 检验，P lt;0. 05 表示差异有统计学意义。 　　3 结果 　　3. 1 咪唑斯汀对DNFB 诱导的皮肤肿胀有明显抑制作用与空白对照组比较，激发皮炎24 h 后，模型组小鼠背部皮肤潮红、充血，明显肥厚，咪唑斯汀组和醋酸地塞米松组小鼠背部皮肤轻微充血，肿胀不明显，皮肤厚度相对于模型组均差异有统计学意义( P lt; 0. 05 ) ; 激发皮炎72 h 后咪唑斯汀组和醋酸地塞米松组皮肤厚度亦显著小于模型组( P lt;0. 05) 。进一步测定各组小鼠背部皮肤肿胀度，结果显示激发皮炎24 h 和72 h 后，咪唑斯汀组和醋酸地塞米松组皮肤肿胀度显著小于模型组( P lt;0. 05) 。说明咪唑斯汀能明显抑制DNFB 诱发的背部皮肤充血水肿，且效果与醋酸地塞米松相当。 　　3. 2 咪唑斯汀对血清细胞因子水平的影响诱发皮炎24 h 后，与空白对照组相比，模型组血清TNF- alpha;、IL - 12 水平显著上升( 均P lt; 0. 05) ， IL - 4 无明显变化( P gt; 0. 05) ; 与模型组相比，咪唑斯汀组和醋酸地塞米松组炎症因子TNF - alpha;、IL - 12 显著降低( 均P lt; 0. 05) ， IL - 4 水平亦无明显变化(