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基于不同分离技术对黄连提取物制备工艺的讨论 　　分离技术是中药现代化过程的共性关键技术之一，是辨识中药药效物质的重要手段，中药产品质量的提高，筛选确黄连为研究对象，以获取黄连总生物碱为研究主线轴，在正向剔除非生物碱类成分的过程中采用醇提法、浓缩醇沉法、明胶沉淀法和大孔树脂法，制备不同分离单元的黄连提取物，并分别对其中总生物碱和小檗碱的含量进行跟踪分析，考察二者转移率变化规律，以评价黄连提取物过程的各分离技术的适用性。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器WJN-50多功能真空浓缩机(韩国);KH-400KDE超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司);需剂充型号梅特勒电子天平(万分之一);UV1102紫外分光光度计(岛津);L-2000日型立型高效液相色谱仪;恒温水浴锅(HH-2型，北京科伟);LGJ-10C型冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂有限公司);L-520型离心机(湖南赛特湘仪离心机有限公司)。 　　1.2 试药黄连药材(购于西安市盛兴中药饮片有限公司);盐酸小檗碱对照品(中国药品食品检定研究院，供含量测定用，批号：110733-200806);D-101型大孔吸附树脂(西安蓝晓科技有限公司提供);水为双蒸馏水，甲醇、乙睛为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 　　2 实验方法与结果 　　参考文献资料，本实验采用醇提法、浓缩醇沉法、明胶沉淀法和D101大孔树脂法制备不同的黄连提取物，以小檗碱和总生物碱为指标，对不同提取物进行定量分析，建立不同伴生物质组成的黄连总生物碱的制备工艺。 　　2.1 分离技术路线 　　2.2 各分离单元黄连总生物碱的制备 　　2.2.1 乙醇回流提取称取黄连药材2 kg，加40%乙醇(9倍、5倍、4倍)回流提取3次，第1次提取1.5 h，第2、3次分别提取45 min，合并3次醇提液，浓缩至7700 mL(即每1 mL相当于0.26 g原药材)，取250 mL留样，进行冷冻干燥(-50 ℃，0.01～0.02MPa，30h)、研细，即得样Ⅰ。 　　2.2.2 醇沉将 　　2.2.1项下其余7450 mL浓缩液加入乙醇使其含醇量达80%，静置24 h，倾出上清液，其余混悬液离心(4000 r/min，5 min)，收集离心沉淀得样Ⅱ，上清液合并，减压回收乙醇并浓缩、调整至4800 mL，取250 mL留样，冷冻干燥(-50 ℃，0.01～0.02MPa，30 h)、研细，即得样Ⅲ。 　　2.2.3 明胶沉淀将 　　2.2.2项下其余4550 mL浓缩液加入含10%NaCl的4%明胶溶液，搅拌均匀，加入乙醇，慢加快搅使含醇量达80%，静置24 h，倾出上清液，混悬液离心(4000 r/min，5 min)收集离心沉淀得样Ⅳ，上清液合并，减压回收乙醇浓缩、调整至4500 mL，取250 mL留样，冷冻干燥(-50 ℃，0.01～0.02MPa，30 h)、研细，即得样Ⅴ。 　　2.2.4 大孔吸附树脂分离将2.2.3项下其余4250 mL浓缩液，过预处理的D101树脂，柱体积为2200 cm3，以1.5BV/h的洗脱速度，依次用去离子水、40%乙醇、95%乙醇进行洗脱。分别收集水洗脱液、40%乙醇洗脱液、95%乙醇洗脱液，回收溶剂并减压浓缩至500 mL、2800 mL、500 mL，冷冻干燥(-50 ℃，0.01～0.02MPa，30 h)、粉碎，依次得到样品Ⅵ(水洗)样品Ⅶ(40%乙醇洗)样品Ⅷ(95%乙醇洗)。 　　2.3 主要成分含量测定 　　2.3.1 UV法测定黄连总生物碱 　　2.3.1.1 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品11 mg，用甲醇定容至10 mL量瓶中。再精密吸取5 mL，加甲醇稀释定容至50 mL，即得对照品溶液。 　　2.3.1.2 供试品溶液的制备称取黄连药材粗粉约0.2 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇-盐酸(100：1)的混合溶液50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率300 W，频率50 kHz)30 min，静置至室温，称定重量，加甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤即得。精密称取样Ⅰ、样Ⅲ、样Ⅴ、样Ⅶ各约0.01 g，置50 mL量瓶中，加45 mL甲醇，超声处理(功率300 W，频率50 kHz)30 min，静置至室温，加甲醇至刻度。分别精密移取0.2 mL，定容至5 mL，即得供试品溶液。 　　2.3.1.3 测定波长的选择甲醇为空白溶液，取盐酸小檗碱对照品溶液进行全波长紫外扫描，在348nm处具有最大吸收峰，因此将348nm作为测定盐酸小檗碱的最大吸收波长。 　　2.3.1.4 标准曲线绘制分别精密吸取上述盐酸小檗碱对照品溶液0.2 mL、0.3mL、0.4 mL、