尿中的四氢大麻酚和四氢大麻酸测定.docVIP

尿中的四氢大麻酚和四氢大麻酸测定 　　四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol，THC)，又称Delta;9-四氢大麻酚(Delta;9-THC)，是大麻中最主要的精神活性成分，在动物和人体中都显示较强的生理活性作用。Delta;9-四氢大麻酸(tetrahydro-cannabinolicacid，THC-COOH)是THC的主要体内代谢物，在体内，大部分迅速形成葡萄糖结合物。目前关于THC及THC-COOH的检测方法主要有气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)等，研究主要集中于血液、尿液和头发等生物样品。然而，气相色谱和气质联用法需要衍生化处理，样品处理操作难，缺乏易得、专一、可靠的衍生化试剂。近几年迅速发展的高效液相色谱-串联质谱(HPLC/MS-MS)具有特异性强、灵敏度高的优点，如卓先义等和Weinmann等检测了尿液中的THC-COOH，Concheiro检测了唾液中的大麻酚类成分，Sandra检测了血浆和尿液中的一些大麻酚类，delMar同时检测了尿液中的大麻酸和大麻酸葡萄糖苷。但在实际的样品检测中，由于生物样本中内源性杂质、仪器配置等条件限制，提取率和检出限较难达到理想的程度，在一定程度上制约了禁毒、戒毒工作的开展。虽然液液萃取和固相萃取较为普及，但液液萃取溶剂消耗量大，环境污染严重，固相萃取成本较高而且操作繁琐。分散固相萃取(dispersivesolid-phaseextraction，dSPE)是一种新型的快速样品预处理技术，开辟了一个全新的快速、绿色、便捷并且能有效去除基质干扰的新型方法，目前已大量用于实际样品的检测。本文采用分散固相萃取法，利用PSA吸附剂净化尿液样品中的干扰成分，降低基质对THC和THC-COOH测定的影响，通过优化分散固相萃取柱条件，建立了较为简便、快速、准确的分散固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法(dSPE-HPLC-MS/MS)测定尿液中THC和THC-COOH的新方法，取得了满意的结果，可用于吸毒者的临床诊断检测。 　　1材料与方法 　　1.1仪器与试剂安捷仑6410型高效液相色谱三重四极杆质谱仪，包括四元泵、在线真空脱气机、柱温箱、自动进样器和电喷雾离子源(ESI，美国Agilent公司);LegendRT型离心机(德国Heraeus公司);全玻璃溶剂过滤器(美国Waters公司);HGC-24型氮吹仪(天津恒奥科技有限公司);LegendRT型离心机(德国Heraeus公司);Milli-Q纯水系统(美国Millipore公司);5ml聚丙烯离心管(上海化学试剂集团公司)。乙腈、甲醇(HPLC级，批号:1922-001、1522-411);THC、THC-COOH对照品溶液(10.0mg/ml，批号:120032-003、1143006);所有溶剂使用前均用0.45mu;m滤膜过滤;盐酸、氨水(分析纯，批号:2015-0203、2015051112)。胺基功能化材料WelchromPSA(上海月旭科技有限公司);空白尿液采自3名年龄在20岁～25岁的健康志愿者(其中2名为男性，1名为女性);实验用水均来自Milli-Q纯水系统。THC和THC-COOH混合标准贮备液(100.0mg/L):分别准确吸取THC和THC-COOH对照品溶液(10.0mg/ml)1.00ml于100ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度。 　　1.2方法 　　1.2.1仪器条件色谱条件:色谱柱:XBridgeTMShieldRP18柱(150mmtimes;2.0mm，2.1mu;m);流速:0.20ml/min;柱温:35℃;流动相:乙腈-20mmol/L乙酸铵水溶液(70∶30，V/V);进样体积:10mu;l。质谱条件:离子源:电喷雾离子源(ESI);扫描方式:负离子扫描;定量检测方式:多反应监测(MRM)模式;扫描范围:m/z200～600;毛细管电压:2900V;毛细管出口电压:230V;干燥温度:350℃;干燥气流速:8.0L/min;喷雾压力:35.0psi。THC的定量离子对为m/z313rarr;m/z191，定性离子对为m/z313rarr;m/z257;THC-COOH的定量离子对为m/z341rarr;m/z297，定性离子对为m/z341rarr;m/z243。 　　1.2.2样品处理在5ml聚丙烯离心管中，加入1.0mol/L的盐酸溶液0.50ml和尿液2.5ml，旋涡振荡1.0min后，加入PSA材料2.0mg，然后以8000r/min离心5min，小心吸取1.0ml上清液，于40℃下氮气吹至近干，用流动相定容至1.0ml，过0.2mu;m滤膜后，进样分析。