杨桃果提取物对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护措施.docVIP

杨桃果提取物对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护措施 　　杨桃(Averrhoa　carambola　L)又名三廉、阳桃、五棱子、五敛子等，为酢浆草五敛子属热带常绿乔木，原产于东南亚的热带和亚热带地区，主要分布在我国广东、广西、福建、海南、台湾及云南等省区。杨桃是华南特产水果，果、根、叶和树皮均可入药，具有祛风热、生津止渴、利尿及解酒毒等作用。据李时珍本草纲目中记载：“杨桃具有去风热、生津、止渴、解酒毒、止血拔毒生肌等多种功效”。随着杨桃有效成分研究的逐步深入，其药理作用也越来越被人们所认识，如保肝等，为利用、保护杨桃资源开拓了新思路。 　　肝脏是人体重要的生物转化器官，也是毒物和药物排出体外前重要的清除器官。因此，极易受到毒性作用发生肝损伤。肝损伤是多因素参与的一个复杂病理过程，自由基及启动的脂质过氧化连锁反应是其主要机制之一。肖湘等采用化学发光法测定杨桃果提取物(YTGE)体外清除氧自由基的活性，结果表明，杨桃果具有清除O2-，·OH和H2O2的作用。本实验研究YTGE对四氯化碳(CCl4)所致小鼠肝损伤的保护作用，探讨其可能的作用途径，为临床应用提供参考依据。 　　1　实验材料 　　1.1　实验动物： 　　昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，体重(20plusmn;2)g，由广西医科大学实验动物中心提供。实验动物生产许可证：SCXK桂2009-0002。常规鼠饲料喂养，自由饮水。 　　1.2　药物： 　　YTGE，由本实验室自行提取完成;加入蒸馏水配制成YTGE 高剂量(YTGEH)、YTGE 中剂量(YTGEM)、YTGE低剂量(YTGEL)，4℃保存备用。联苯双酯滴丸：广州白云山星群(药业)股份有限公司，批号：JF40035 　　1.3　试剂： 　　丙氨酸转氨酶(ALT，批号和天冬氨酸转氨酶(AST，批号检测试剂盒，超氧化物歧化酶(SOD，批号，丙二醛(MDA，批号：2014021)，考马斯亮蓝(批号检测试剂盒。均由南京建成生物工程研究所提供。 　　1.4　仪器： 　　光学显微镜、721紫外可见分光光度计UVmini-1240、EL204电子天平(上海特勒-托多利多仪器有限公司)、TDL-5台式低速大容量离心机(上海安亭科学仪器厂)、TGL-16G-A 高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)、SHHW21.Cr600三用电热恒温水箱(北京长源实验设备厂)、RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。 　　2　实验方法 　　2.1　YTGE的提取和制备： 　　杨桃果洗净，把削理好的新鲜部分切成小块，称重，搅拌机打汁，4层纱布过滤，合并滤液，用旋转蒸发仪浓缩至2g生药/mL，4℃保存。 　　2.2　分组与给药及模型制备： 　　取健康合格，体重(20plusmn;2)g的昆明种小鼠60只，随机分成6组，每组10只，即正常对照组、模型对照组(CCl4)、阳性[联苯双酯(150mg/kg)]对照组、YTGEL(5g生药/kg)组、YTGEM(10g生药/kg)组、YTGEH(20g生药/kg)组，每组10只，灌胃给药，正常对照组给予等容量的生理盐水。连续给药7d，期间所有小鼠均食用标准条状饲料，并观察记录其精神状态、反应活动、毛发光泽、食欲排泄、体质量变化等情况。末次给药后1h，正常对照组按0.2mL/10g的给药容量皮下腹腔注射生理盐水，其余各组按相同的给药容量腹腔注射0.2% CCl4花生油溶液(0.2mL/10g)，禁食不禁水约20h。摘眼球取血，处死动物，剖腹取出肝脏，取肝大叶相同部位的小块肝组织用10%福尔马林溶液固定;另外，切取适量肝组织，以生理盐水制备成10%匀浆，3　500r/min离心15min，吸取上清液，-20℃冻存。将凝固的血液于3　000r/min离心10min，分离血清，-20℃冻存。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学要求。 　　2.3　血清AST、ALT的测定： 　　严格按试剂盒说明书的要求测定血清中的AST(2，4-二硝基苯肼法)、ALT(2，4-二硝基苯肼法)。 　　2.4　肝组织MDA和SOD的测定： 　　严格按试剂盒说明书的要求测定肝组织匀浆中SOD(羟胺法)、MDA。 　　2.5　肝组织病理损伤观察： 　　10%福尔马林溶液固定的肝组织经常规脱水，石蜡包埋，切片和HE染色后在显微镜下观察病理改变。 　　2.6　统计学分析： 　　采用SPSS　16.0软件对数据进行统计学分析，计量资料采用珚xplusmn;s表示，组间比较采用单因素方差分析，多组间的两两比较采用SNK-q检验;P lt;0.05为差