α-淀粉酶的固定化以及淀粉水解作用的检测.docxVIP

《α-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测》实验方案第二实验班 一组组长：张金昌组员：胡建军、朱恩梅、石仙竹、谢娟丽、李昀奕、郭天天2013．10.15α-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测实验背景资料：酶：活细胞产生的具有催化作用的有机物，其中绝大多数酶是蛋白质；具有高效性、专一性，同时，也有高度不稳定性，因为绝大多数酶的本质是蛋白质，凡是能使蛋白质变性的因素，如高温、高压、强酸、强碱等都会使酶丧失活性。酶促反应：指由酶作为催化剂进行催化的化学反应；α-淀粉酶：为枯草杆菌的α-淀粉酶，其作用的最适PH为5.5~7.5，最适温度为50~70℃。广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物。此酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分解直链淀粉时以麦芽糖为主，此外，还有麦芽三糖及少量葡萄糖；在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖外，还生成分支部分具有α-1，6-键的α-极限糊精。固定化酶：借助于物理和化学的方法把酶束缚在一定的空间内并仍具有催化活性的酶制剂。酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化。吸附法是酶分子吸附于水不溶性的载体上，它的优点是操作简便，条件温和，不会引起酶变性或失活，且载体廉价易得，可以反复使用。吸附剂：常用的吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等。活性炭：活性炭是一种多孔性的含炭物质, 它具有高度发达的孔隙构造, 是一种极优良的吸附剂, 每克活性炭的吸附面积更相当于八个网球埸之多. 而其吸附作用是藉由物理性吸附力与化学性吸附力达成. 其組成物质除了炭元素外，尚含有少量的氢、氮、氧及灰份，其結构则为炭形成六环物堆积而成。由于六环炭的不规则排列，造成了活性炭多微孔体积及高表面积的特性。硅胶：硅胶是由硅酸凝胶mSiO2·nH2O适当脱水而成的颗粒大小不同的多孔物质。具有开放的多孔结构，比表面（单位质量的表面积）很大，能吸附许多物质，是一种很好的干燥剂、吸附剂和催化剂载体。硅胶的吸附作用主要是物理吸附，可以再生和反复使用。 在碱金属硅酸盐（如硅酸钠）溶液中加酸，使之酸化，再加入一定量的电解质进行搅拌，即生成硅酸凝胶；或者在较浓的硅酸钠溶液中加酸或铵盐也能生成硅酸凝胶。将硅酸凝胶静置几小时使之老化，然后用热水洗去可溶性盐类,在60～70℃下烘干并在约300℃时活化，即可得硅胶。氧化铝：影响活性氧化铝吸附性能的主要因素包括以下几方面：（1）颗粒粒径：粒径越小，吸附容量越高，但粒径越小，颗粒强度越低，影响其使用寿命。（2）原水PH值：当PH值大于5时，PH值越低，活性氧化铝吸附容量越高。⑶原水初始氟浓度：初始氟浓度越高，吸附容量较大。（3）原水碱度：原水中重碳酸根浓度高，吸附容量将降低。（4）氯离子和硫酸根离子。（5）砷的影响：活性氧化铝对水中的砷有吸附作用，砷在活性氧化铝上的积聚造成对氟离子吸附容量的下降，且使再生时洗脱砷离子比较困难。石英砂：是石英石经破碎加工而成的石英颗粒，石英石是一种非金属矿物质，是一种坚硬、耐磨、化学性能稳定的硅酸盐矿物，其主要矿物成分是SiO2，石英砂的颜色为乳白色、或无色半透明状，硬度7，石英砂是重要的工业矿物原料，非化学危险品，广泛用于玻璃、铸造、陶瓷及耐火材料、冶炼硅铁、冶金熔剂、冶金、建筑、化工、塑料、橡胶、磨料等工业。因为其性质稳定、能耐酸、耐碱、耐磨，腐蚀性小，不易燃烧，廉价，所以选择石英砂作为酶的吸附剂。为何选用石英砂？石英砂作为酶的吸附剂的优缺点：固定化酶有许多方法，本实验中采用的是吸附法。吸附法有物理交换法和离子交换法两种。其中本实验采用的又是物理交换法。该方法是将酶蛋白的分子吸附在惰性载体上，但要选择不引起变性且能保持一定酶活力的载体，且对蛋白质要有高度吸附能力。自然界中有机硅胶、活性炭和石英砂等都可以被用于做载体。现已了解其中石英砂对固定化α-淀粉酶、胰蛋白酶作用较好。优点：石英砂表面带正电荷，蛋白质为两性物质，在大于其等电点的条件下，蛋白质带负电荷，由此能吸附在石英砂表面，α-淀粉酶被石英砂吸附属于物理吸附法，将蛋白质分子吸附在惰性载体（石英砂）上，酶不会引起变性，且能保持一定酶活力，对蛋白质有高度吸附能力。缺点：是非金属矿物质，不具有多孔结构，在吸附性上稍差，同时，石英砂质脆，坚硬，易磨细，不利于过滤。吸附剂一般有孔结构，对吸附质有强烈吸附能力，一般不与吸附质和介质发生化学反应，有良好机械强度等，如活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等。固定化酶与游离酶的比较：类型优点不足游离酶（1）催化效率高；（2）低耗能；（3）低污染；（1）环境条件非常敏感，容易失活；（2）溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；（3）反应后酶会混在产物中，难分离；固定化酶（1）提高了酶的稳定性，