谈丹蒌片对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制.docVIP

谈丹蒌片对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制 　再灌注治疗能快速打开堵塞血管、恢复冠脉血供，是治疗冠心病急性心肌梗死的重要手段，据统计我国2013 年冠状动脉经皮介入术( percutaneouscoronary intervention，PCI) 的病例数超过40 万例，位居世界第2 位。但再灌注治疗只是一种局部治疗，并不能终止冠心病的病理发展进程，加之治疗后出现的一系列心肌缺血再灌注损伤( myocardialischemia reperfusion injury，MIRI) ，严重制约了冠心病的治疗效果。有研究证实，急性心肌梗死( acutemyocardial infarction，AMI) 患者即使接受最佳的再灌注治疗，仍有10% ～ 30%出现MIRI，MIRI 被认为是导致心梗后心力衰竭发生率高达25% 及年死亡率达10% 的主要原因，因此防治MIRI 是临床亟需解决的问题。动物实验发现内皮功能障碍、脂质氧化损伤、炎症反应、钙超载及能量代谢等在MIRI的发生发展中起重要作用。 　　MIRI 目前临床尚缺乏有效的干预药物，中医药具有作用通路广泛、作用靶点多样的特点，在临床应用中具有独到的优势。丹蒌片是痰瘀同治的上市药物，临床用于治疗各类冠心病心绞痛，临床疗效良好，目前关于丹蒌片的实验研究大都针对心肌梗死后对心脏的保护作用，而对MIRI 后心脏保护作用的研究鲜有报道。课题组前期实验研究发现，丹蒌片能降低大鼠心肌缺血程度，增加离子转运通道相关酶活性，减少短暂心肌缺血再灌注诱导的致命性及非致命性室颤发生率、室性心动过速及室性早搏的发生频率及持续时间。在此基础上，为阐明丹蒌片对已有心肌不可逆坏死的心肌缺血再灌注治疗后的心脏保护作用，本研究观察其对大鼠心肌坏死程度及心脏射血分数的影响，并从内皮功能保护、抑制脂质过氧化及细胞凋亡方面探讨其作用机制，为扩大丹蒌片的临床应用范围提供数据支撑。 　　1 材料 　　1. 1 动物清洁级雄性健康Wistar 大鼠80 只，体重( 300 plusmn; 20) g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK( 京) 2012-0001，在中国中医科学院广安门医院动物中心适应性喂养3 d。 　　1. 2 药品及试剂丹蒌片( 吉林康乃尔药业有限公司，国药准字 ; 羧甲基纤维素钠，2，3，5-氯化三苯基四氮唑( TTC) ，伊文思蓝，水合氯醛( 国药集团化学试剂有限公司，批号分别2014050720130201) ; 乳酸脱氢酶( LDH) 试剂盒，肌酸激酶同工酶( CK-MB) 试剂盒( 贝克曼库尔特实验系统有限公司，批号分别为AUZ1443，OSR61155) ; 大鼠内皮素( ET) 试剂盒( 北京北方生物技术研究所，批号 ; 大鼠一氧化氮( NO) ，丙二醛( MDA) 及髓过氧化物酶( MPO) 试剂盒( 南京建成生物工程研究所，批号分别为A012，A003-1，A044 ) ; Protease inhibitorcocktail( Roche 公司，批号11684817910) ; 蛋白免疫印迹法( Western blot) 抗体含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶( Caspase) -3，B 细胞淋巴瘤-2( Bcl-2) 及Bcl-2相关X 蛋白( Bax) ( CST 公司，批号分别为12768，2772， 2870) ; beta;-肌动蛋白( beta;-actin) 抗体( 中杉金桥公司，批号TA-09 ) ; DNA 断裂的原位末端标记法( TUNEL) 反应液( Roche 公司，货号11684817910) 。 　　1. 3 主要仪器RM6240BD 型多通道生理信号采集处理系统，HX-300 型小动物呼吸机( 成都泰萌科技有限公司) ; Pro Sound 5000 SSD-SV B 型超声仪( 日本Aloka 株式会社ALOKA 医用仪器有限公司) ; AU640 型全自动生化分析仪( 美国Olympus 公司) ; Image Pro Plus 6. 0 图像分析系统软件( 美国Media Cybernetics 公司) ; UV-2000 型紫外分光光度计( 上海尤尼柯公司) ; TGL-16 型台式高速冷冻离心机( 长沙湘仪离心机仪器有限公司) ; SPR-960 型全自动酶标仪( 美国Thermo 科技公司) ; VE186 型小型高通量垂直电泳槽VE180 及转移电泳槽( 上海天能公司) 。 　　2 方法 　　2. 1 分组及给药大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、丹蒌片组，假手术组22 只，模型组30 只，丹蒌片组