实验七血乳酸的定量测定杨氏改良法.pptVIP

实验七 血乳酸的定量测定  (杨氏改良法) 复习巩固血乳酸的生成机理及其在生化评定中的意义。 学会测定血乳酸的操作方法及理解作用原理。 进一步巩固试管实验的操作技能，熟练掌握学乳酸在运动实践中的评定意义。 无蛋白清液中的乳酸能被浓硫酸氧化分解成乙醛，在铜离子存在时，乙醛与对羟基联苯反应，生成紫红色复合物。其颜色的深浅与乙醛浓度成正比。再与同样方法处理的标准液进行比色，即可求出血液中乳酸的含量。 三、试剂 1%的氟化钠溶液 10%的三氯醋酸溶液 浓硫酸 对羟基联二苯 4%的硫酸铜溶液 乳酸标准贮存液（1ml=1mg）：称取乳酸钙或乳酸锂173mg用蒸馏水溶解至100ml。 乳酸标准应用液（1ml=10μg）：准确量取贮存液1ml于100ml的容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。 乳酸空白液：将1%的氟化钠和10%的三氯醋酸溶液按1:3体积比混合而成。 制备无蛋白血滤液：取2只离心管，按表1操作： 取3只大试管，编号，按表2操作： 计算公式： 浓硫酸对显色影响很大，必须选用纯净浓硫酸。加浓硫酸时，应把试管放入冷水中，慢慢滴加。浓硫酸有强的氧化性和腐蚀性，使用时要小心。 准确控制水浴的时间和温度。 滴加对羟基联二苯时，试管应充分冷却，滴加时防止附着于管壁并充分摇匀。 运动生物化学实验课件 陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 一、 实验目的 二、实验原理 乙醛 +对羟基联苯 Cu2+ 紫红色复合物 （560nm处有一吸收峰） 乳酸 浓H2SO4 加热 四、实验操作 充分混匀后，离心5min (3000r/min) ，将上清倒入另一离心管中 0.48 0.02 1.5 1%的氟化钠溶液（ml） 新鲜血液（ml） 10%的三氯醋酸溶液（ml） 离心管1 表1 无蛋白血滤液的制备 表2 血乳酸的测定 充分混匀后，置37℃水浴保温15min，其间每5min振摇一次。沸水浴90s,冷水浴冷却至室温，以空白管调零，560nm波长比色 2 2 2 对羟基联二苯（滴） 充分混匀，沸水浴5min,冷水浴冷却至15℃左右 — — 0.5 1 3 — 0.5 — 1 3 0.5 — — 1 3 乳酸空白液（ml） 乳酸标准应用液（ml） 无蛋白血滤液（ml） 4% CuSO4（滴） 浓硫酸（ml） 测定管 标准管 空白管 OD测 血乳酸（mg%） = -------------------- × 25 OD标（0.165） 血乳酸（mg%） 血乳酸（mmol/L） = ----------------------- 9 五、实验结果 六、注意事项 运动生物化学实验课件 陕西师范大学体育学院实验教学示范中心