实验三植物细胞（二）.doc

实验二 植物细胞分裂 一、 目的和要求器具 ⒈ 掌握植物细胞有丝分裂的主要过程及各期特征； ⒉ 了解无丝分裂过程，并与有丝分裂过程进行比较。 二、器具与材料 ⒈ 器具：生物显微镜； ⒉ 材料：洋葱根尖纵切制片、洋葱幼根、水稻愈伤组织制片。 二、 内容和方法 植物的细胞分裂有多种方式，如有丝分裂、无丝分裂、减数分裂等。这里只介绍有丝分裂、无丝分裂。 (一)有丝分裂 有丝分裂是植物细胞最常见的分裂方式。要做好这次实验必须考虑到两个问题：第一要掌握好细胞进行有丝分裂的时间（根据实验观察，在自然条件或室温培养条件下，多数植物M期发生在上午9——12时和下午2——5时），否则很难观察到有丝分裂的全过程，有时甚至看不到有丝分裂；第二是用什么方法进行观察，是将茎尖、根尖等材料切成薄片，还是用离析的方法把细胞“打散”进行观察。前一种观察方法是用做好的切片进行观察，切片厚度一般为8——12微米，其厚度大约等于一个分生组织细胞的直径，优点是可以看到分裂的各个时期，并能清楚地看到各时期的细致特征，缺点是一个切面不可能保持完整细胞形态，也就是看不到分裂细胞全貌，当然更不能计算出细胞中所含有全部染色体的数目。而离析法是把细胞“打散”，每个细胞分散开，既便于观察整个细胞，也便于计算每一细胞中的染色体数目，但不能清楚地看到分裂各时期的细致特征。因此，要要要根据不同的实 图3—1 洋葱根尖纵切 验目的选用不同的方法进行观察。 取洋葱根尖纵切制片在低倍镜下观察，可见其最前端由许多不规则的薄壁细胞组成 的帽状结构——根冠；在根冠内方，细胞形态为近方形，横壁一般比纵向壁略长，此区域为分生区（图3-1）。观察植物细胞有丝分裂应在分生区内，将分生区移至视野中央，转换至高倍镜下仔细观察，按照各期细胞核特征，寻找处于有丝分裂不同时期的细胞。 各期细胞核特征如下： ⒈ 间期：是有丝分裂的准备阶段，表面看来，这一时期似乎处于静止状态，在细胞核中，核仁明显，核质中有分散的染色质，其实细胞内部正进行着DNA的复制。 ⒉ 前期：细胞内可见各种形状的染色体颗粒或细丝，前期末出现纺锤体？，核仁、核膜消失（图3-2）。 ⒊ 中期：染色体进一步缩短，整齐地排列在赤道板上（图3-2）。 ⒋ 后期：染色体由着丝粒处断裂，每一条的染色体的两条染色单体彼此分开，并相背的离开赤道面，各向一极移动（图3-2）。 图3—2洋葱根尖纵切——细胞周期 ⒌ 末期：染色体解螺旋，变细，重新分散成为染色质，核仁、核膜逐渐出现。在原赤道板的的位置上，可通过细调焦手轮连续变焦，可见一电子密度很大的区域，此为成膜体，在成膜体中还可以观察到一条“亮”带，即为细胞板。细胞板在中央首先形成，然后向两边扩展，分割细胞质（图3-2）。 观察制片以后，用刀片截取已培养好的洋葱鳞茎长出的幼根根尖，其长度以5毫米为宜。截取下的根尖放入醋酸—纯酒精（1：3）固定液中固定15—30分钟。然后用95%酒精洗净醋酸，移入70%酒清中，再用水冲洗后转入1mol/L盐酸中。在60℃下水解10分钟后，水洗1-2次即可压片观察。 压片时，取已处理好的根尖放在载玻片上。用解剖刀或解剖针，把根尖自伸长区以上部分切去，只剩下1—2毫米长的一段。滴一滴醋酸-洋红溶液染色，约10分钟后，根尖染为暗红色即可。也可以放在酒精灯上略微加热，这样可使细胞质破坏，增进染色体的染色。但不宜过于加热，如将染料煮沸则使细胞干缩毁坏，染料沉淀而不能观察。染色后加上盖玻片，在平坦桌面上，用大拇指压盖玻片，使根尖细胞分散开，即可在显微镜下观察。 如用石炭酸-品红代替醋酸洋红染色效果更好，石炭酸-品红把核和染色体染为红紫色，细胞质一般染不上颜色，故背景清晰。 由于上述方法，没有经过切片，因此每个细胞都是完整的，便于观察染色体。观察过程中要特别注意细胞分裂的中期。洋葱体细胞具有16条染色体，用压片法制片，可将中期的染色体压散，看出各条染色体的形态。试观察各条染色体的着丝点的部位和形状，能否看到具有随体的染色体？ 还可以用百合、小麦等植物材料的根尖、茎尖制片来观察有丝分裂各期特征、染色体的形态及计数染色体数目。 （二）无丝分裂 无丝分裂是指不出现有丝分裂相的一种细胞分裂方式。无丝分裂常出现在某些高等植物某些器官中，如大麦的生长点，小麦的胚乳，以及一些离体培养的愈伤组织等。无丝分裂依其核的形态变化可分为许多类型如横缢、出芽等。先以横缢加以说明。在横缢方式的分裂时， 图3—3 水稻愈伤组织 首先是核仁分裂为