5分子生物学研究法-上——DNA、RNA及蛋白质操作技术幻灯片.pptVIP

基因操作主要包括DNA分子的切割与连接、细胞转化、核酸序列分析以及基因人工合成、表达、定点突变和PCR扩增等，是分子生物学研究的核心技术。 基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，使之进入原先没有这类分子的寄主细胞内并进行持续稳定的繁殖和表达。 基因工程技术是核酸操作技术的一部分，只不过它强调了外源核酸分子在另一种不同的寄主细胞中的繁衍与性状表达。 事实上，这种跨越物种屏障、把来自其它生物的基因置于新的寄主生物细胞之中的能力，是基因工程技术区别于其它生命科学技术的根本特征。 5.1 基因操作的基本工具 （一）限制性核酸内切酶 能够识别DNA上的特定碱基序列并从这个位点切开DNA分子。 第一个核酸内切酶EcoR I是Boyer实验室在1972年发现的，它能特异性识别GAATTC序列，将双链DNA分子在这个位点切开并产生具有粘性末端的小片段。 重组DNA实验中常见的主要工具酶 （二）基因克隆的载体 载体三要素： 自我复制能力 携带外源基因片段大小 插入位点多少 大肠杆菌质粒载体： 1、pSC101质粒载体 长9.09kb，带有四环素抗性基因（tetr）及EcoR I、Hind III、BamH I、Sal I、Xho I、Pvu II以及Sma I等7种限制性核酸内切酶的单酶切位点，在Hind III、BamH I和SalI等3个位点插入