花生Clp家族成员的筛选、聚类和盐胁迫响应分析.docVIP

花生Clp家族成员的筛选、聚类和盐胁迫响应分析 　　摘 要：Clp蛋白酶是一种ATP依赖的丝氨酸型蛋白酶，广泛存在于原核和真核生物中，在生物抗逆胁迫中发挥重要作用。为分析花生中Clp基因的情况，我们构建了花生叶片转录组数据库，通过生物信息学手段鉴定出28个Clp基因，分别位于花生A组野生种的9条染色体上；聚类分析表明，花生的28个Clp基因分别聚到已报道的ClpB、C、D、X、P、R和S 7个亚类中。利用花生耐盐突变体（S2）和对照（S4）构建了盐胁迫处理前后各时间段的表达谱数据，进行Clp基因盐胁迫表达分析，结果表明16个Clp基因在S2和（或）S4中受盐胁迫诱导表达。该研究为花生Clp基因的功能研究与利用奠定基础。 　　关键词：花生；Clp基因；RNA测序；盐胁迫 　　中图分类号：S565.203.53文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）12-0001-05 　　Abstract Clp is a kind of ATP-dependent protease widespreading in prokaryote and eukaryote， which plays an important role in resisting biotic and abiotic stresses in plants. To improve the understanding of Clp genes in peanut，28 Clp genes were screened by one transcriptome library constructed with peanut leaves. These 28 Clp genes distributed on 9 chromosomes respectively of A genome of wild peanut. Clustering analysis showed that these 28 Clp genes were assorted to ClpB， C， D， X， P，R， S groups reported previously. To analyze the response to salinity stress of 28 Clp genes，digital gene expression profiles were constructed using a mutant with higher salinity resistance （S2） and its control （S4） before and after treated with 250 mmol/L NaCl. The results showed that 16 Clp genes were responsive to salinity stress in S2 and/or S4. This study provided bases for functional researches and application of Clp genes in peanut. 　　Keywords Peanut （Arachis hypogaea L.）；Clp gene；RNA sequencing；Salinity stress 　　Clp蛋白酶是一种ATP依赖的丝氨酸型蛋白酶，属于AAA+类ATP酶超级家族。Clp家族基因在植物中广泛存在，有些成员在受到非生物胁迫时可被诱导表达。蓝藻在强光、低温、UV-B等外界胁迫下的生长状况与Clp蛋白酶密切相关[1]。拟南芥和玉米胞质ClpB基因能够恢复其突变体的耐热性[2-4]。超表达拟南芥胞质ClpB基因后，拟南芥生长速度加快，而且能够耐45℃的高温胁迫[5]。反义抑制番茄的叶绿体类ClpB基因后，转基因植株对高温更为敏感，表明叶绿体类ClpB基因可能是植物耐热过程中的重要蛋白[6]。拟南芥ClpA类似物在水分胁迫下被诱导表达，在植株衰老时表达量有所增加[7]。但Clp基因与植物耐盐性关系的报道非常少。 　　花生是重要的油料和经济作物，培育高产耐盐花生品种不仅可以丰富育种资源，同时对花生耐盐的分子机理研究也具有重要作用。然而花生缺乏耐盐种质资源[8]，利用常规杂交方法难以选育出耐盐品种。因此挖掘花生的耐盐基因并进行功能研究是花生抗逆分子育种的重要任务之一。 　　目前，关于花生中Clp基因的研究相对较少。纪鸿飞等[9]利用花生品种鲁花14号种子不同发育时期混合cDNA文库，筛选到1个AhClpP蛋白酶基因，但未报道该Clp基因是否受胁迫诱导。为了探究Clp基因在花生中是否受盐胁迫诱导表达，本研究从转录组整体水平上分析花生Cl