HPLC法测定熊胆汁中牛磺熊去氧胆酸含量的研究.docVIP

HPLC法测定熊胆汁中牛磺熊去氧胆酸含量的研究 　　摘要：目的建立熊胆汁中牛磺熊去氧胆酸含量的HPLC测定方法。方法用甲醇前处理熊胆汁；以十八烷基键合硅胶为填料；甲醇-磷酸二氢钠溶液（0.03 mol/L）（68：32）为流动相，并用磷酸调节pH值为4.4；柱温40℃；流速1.0 mL/min；进检测波长为210 nm。结果牛磺熊去氧胆酸进样浓度在0.1045 mg/mL～1.045 mg/mL之间呈良好的线性关系，r=0.9999，回收率在98%～102%之间，回收率RSD1.5%。结论方法准确、简便、快速，可为熊胆汁的检测及监控提供技术依据和支持。 　　关键词：熊胆汁；HPLC法；牛磺熊去氧胆酸；含量测定 　　中图分类号：284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）10-0078-03 　　Study on Taurocholate Ursodeoxycholic Acid Content in Bear Bile by HPLC 　　LI Jia-quan， ZHENG Kun-fang 　　（Dali Ruipin Junge Pharmaceutical Co.， Ltd.， Dali 671099， Yunnan） 　　【Abstract】Objective： To establish a HPLC method to determine taurocholate ursodeoxycholic acid content in bear bile. Methods： Bear bile was pre-treated with methanol. Octadecyl bonded silica was taken as a filler， methanol-sodium dihydrogen phosphate solution （0.03 mol/L） （68：32） as mobile phase， and phosphoric acid was used to adjust to pH 4.4. The column temperature was 40℃， with 1.0 mL/min of flow rate， 210 nm of detection wavelength. Results： The sample concentration of taurocholate ursodeoxycholic acid showed a good linear relationship between 0.1045 mg/mL and 1.045 mg/mL， r=0.9999， with the recovery rate between 98% to 102% and recovery rate RSD 1.5%. Conclusion： The method is accurate， simple and rapid， and can provide a technical base and support for the detection and monitoring of bear bile. 　　【Key words】bear bile， HPLC method， taurocholate ursodeoxycholic acid， determination 　　熊科动物黑熊经胆囊手术引流而得熊胆汁经干燥制成的熊胆粉，已收载于1989年试行、1996年转为国家正式实行的药品标准[1]，并收载于2015年版《中国药典》附录，作为天然熊胆的替代品入药。牛磺熊去氧胆酸（TCDCA）是熊胆粉主要有效和特有成分，故熊胆粉药品标准中规定TUDCA的含量不得低于23%。但熊胆粉药品标准中未对其原料熊胆汁中TUDCA含量的测定方法作出规定。而熊胆汁和熊胆粉中TUDCA含量的测定方法有一定的差异。熊胆汁原料关乎到所制成熊胆粉的质量，对熊胆汁质量的分析和控制是十分重要的，而其TUDCA含量的测定方法没有报道。本文建立熊胆汁中牛磺熊去氧胆酸含量的HPLC测定方法。方法准确、简便、快速，为熊胆汁的检测及监控提供技术依据和支持。 　　1仪器与试药 　　LC98Ⅰ型、LC99Ⅱ型高效液相色谱仪（北京温分分析技术有限公司）、7725Ⅰ型手动进样阀、双通道色谱软件工作站（浙大智达）、UV98I可变波长紫外检测器、C18 5μShodex ID4.6×250mm色谱柱（原装进口）、BCD-176SQMK型美的电冰箱（合肥美的电冰箱有限公司）、SK3300H型超声仪（上海科导超声仪器有限公司）、微孔滤膜（上海津腾）、色谱甲醇（fisher）、牛磺熊去氧胆酸钠（中国食品药品检定研究院，