子宫内膜腺癌雌激素受体亚型的表达及其与临床病理的关系.docVIP

子宫内膜腺癌雌激素受体亚型的表达及其与临床病理的关系 　　[摘要] 目的 探讨雌激素受体α（ERα）、ERβ在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。 方法 选择2011年1月～2012年12月在广西医科大学附属肿瘤医院经组织学证实的93例子宫内膜腺癌（子宫内膜癌组）及31例正常子宫内膜（对照组）组织，分别采用qRT-PCR及免疫组化法检测ERα、ERβ mRNA及蛋白的表达情况。 结果 子宫内膜癌组ERα mRNA 表达量及蛋白阳性表达率、ERα/ERβ mRNA均明显低于对照组，差异均有统计学意义（P 0.05）。子宫内膜癌组织中ERα与ERβ阳性表达率呈负相关（r = -0.234，P 0.05）。 结论 在子宫内膜癌的发生发展中，ERα的变化可能较ERβ更有意义，ERα/ERβ mRNA比值可作为判断子宫内膜癌预后的指标。 　　[关键词] 子宫内膜腺癌；雌激素受体α；雌激素受体β 　　[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）02（b）-0087-04 　　子宫内膜癌被认为是一种激素依赖性肿瘤，雌激素受体（ER）、孕激素受体水平的改变与子宫内膜癌的发生发展及预后密切相关。本实验通过PCR技术及免疫组化检测子宫内膜癌中ERα、ERβ表达的变化，以探讨其与子宫内膜癌发生发展的关系及临床意义。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取2011年1月～2012年12月在广西医科大学附属肿瘤医院因子宫内膜癌手术治疗切除的子宫内膜组织93例（子宫内膜癌组），年龄33～76岁，中位年龄53岁，术前均无雌、孕激素使用史。术后经病理证实。手术病理分期按国际妇产科联盟2009年的标准：Ⅰ期55例，Ⅱ期18例，Ⅲ期16例，Ⅳ期4例。组织学分级：高分化45例，中分化28例，低分化20例。对照组选取因良性妇科肿瘤行子宫切除的正常子宫内膜31例，其中增生期21例，分泌期10例，年龄36～54岁，中位年龄48岁。 　　1.2 主要试剂 　　Fast Start Universal SYBR Green Master（ROX）购自美国Roche公司，RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit购自加拿大Fermentas公司，鼠抗人单克隆抗体ERα购自Santa Cruz公司，鼠抗人单克隆抗体ERβ购自GeneTex公司，免疫组化染色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 　　1.3 荧光定量PCR技术检测各组组织中ERα mRNA和ERβ mRNA的表达 　　Trizol法提取各组组织总RNA，利用RT-PCR试剂盒合成cDNA。ERα基因引物序列，上游：5-TGCCAAGGAGACTCGCTAC-3，下游：5-CTTCGTAGCATTTGC GGAG-3，扩增产物片段长度为209 bp；ERβ基因引物序列，上游：5-GGTCCATCGCCAGTTATCACAT-3，下游：5-GATGCGTAATCGCTGC AGACAG-3，扩增产物片段长度为227 bp；以GAPDH基因为内参照，其引物序列，上游：5-GAAGGTGAAGGTCGGAGT-3，下游：5-GAAGATGGTGATGGGATTT C-3，扩增产物片段长度为225 bp。PCR反应体系共20 μL，包括DNA荧光染料SYBR Green 10 μL，上、下游引物各0.5 μL，cDNA模板2 μL，加水至20 μL。PCR反应条件：95℃预变性10 min，95℃ 15 s，60℃ 60 s，35次循环。采用2-ΔΔCt法对数据进行相对定量分析。实验重复3次，取均值。 　　1.4 采用免疫组织化学SP法检测ERα蛋白和ERβ蛋白的表达 　　石蜡切片（厚4 μm）经二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，3 %双氧水封闭内源性过氧化物酶活性，室温浸泡，磷酸盐缓冲液（PBS）振洗后，分别以鼠抗人单克隆抗体ERα 1∶200、或ERβ 1∶200，4℃孵育过夜，过氧化物酶标志的山羊抗小鼠IgG，37℃孵育，PBS振洗，DAB显色，苏木精复染，脱水，透明，树胶封片。每次实验均设立阳性及阴性对照，ER以已知阳性的乳腺癌切片作阳性对照，以PBS液代替一抗作阴性对照。 　　1.5 结果判定 　　ERα、ERβ蛋白阳性染色主要定位于细胞核，细胞核内有黄色或棕黄色颗粒分布者即为阳性细胞。每张切片在阳性表达较高区域随机选择5个高倍视野（400倍），每个视野至少计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞所占比例。 　　1.6 统计学方法 　　采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表