色谱分析法2课件.ppt

气相色谱分析方法 1、定性分析 （1）保留时间定性法（已知物对照方法） 在一定的色谱系统和操作条件下，每种物质都有一定的保留时间，如果在相同色谱条件下，未知物的保留时间与标准物质相同，则可初步认为它们为同一物质。 为了提高定性分析的可靠性，还可进一步改变色谱条件（分离柱、流动相、柱温等）或在样品中添加标准物质，如果被测物的保留时间仍然与标准物质一致，则可认为它们为同一物质。 （2）保留指数（I）定性法 以正构烷烃为参考标准为100N，某一未知组分的保留行为用两个紧靠近它的标准物质（正构烷烃）来标定： I = 100 N N为碳原子数 保留指数定性法实例 例如：苯在某柱子上的 Ix = 733 表示苯在该柱上的保留值相当于含7.33个碳原子的正构烷烃的保留值。所以保留指数可计算如下： 与其他仪器联用定性 将具有定性能力的分析仪器如红外(IR）、核磁（NMR）、质谱（MS）、原子光谱（AAS、AES）等仪器作为色谱仪的检测器获得比较准确的定性信息。 由于保留值（保留时间、保留指数等）定性受温度影响，因此应严格控制温度； 当两个化合物的保留值相同或相近时，容易出现错判。 定量分析 色谱定量分析的依据是被测物质的量与它在色谱图上的峰面积（或峰高）成正比。 校正因子 分为绝对和相对校正因子两种。 绝对校正因子为 绝对校正因子受实验条件的影响，定量分析时必须与实际样品在相同条件下测定标准物质的校正因子。常用相对校正因子。 相对校正因子fm指某物质i与一选择的标准物质S的绝对校正因子之比。 即 相对校正因子只与检测器类型有关，而与色谱条件无关。 常用于作为标准物质S的有苯（热导检测器）和庚烷（氢火焰离子化检测器）等 定量分析的方法 A、归一化法 若流出色谱柱组分的总量为： 则X组分所占的百分含量为 定量分析的方法 B、外标法 将某组分的峰面积与该组分标准峰面积直接比较定量。或采用标准曲线法定量： 定量分析的方法 C、 内标法 比较标准质和被测组分的峰面积，从而确定被测组分的浓度 由于标准物质和被测组分处在同一基体中，可以消除基体带来的干扰。当仪器参数和洗脱条件发生非人为的变化时，标准物质和样品组分都会受到同样影响，这样消除了系统误差。 内标物应满足的要求 在所给定的色谱条件下具有一定的化学稳定性； 在接近所测定物质的保留时间内洗脱下来； 与两个相邻峰达到基线分离； 物质特有的校正因子应为已知的或者可测定； 与待测组分有相近的浓度和类似的保留行为； 具有较高的纯度。 气相色谱的应用举例 毛细管气相色谱 高效，100万理论塔板数，可分离复杂物质； 分离速度快； 灵敏度高； 适合复杂组成的分析； 气相色谱重要内容 色谱法原理 固定相，流动相； 保留时间； 分配系数； 分离度； 塔板理论； 流速的影响； 柱温的影响； 气相色谱仪结构 检测器种类及特点 灵敏度和检测限 色谱柱的种类和特点 定性分析方法 定量分析方法 样品制备方法 毛细管色谱法 思考题 p255-256 Q2， Q4，Q7，Q9，Q10 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography HPLC 朱永法 清华大学化学系 概述 高效液相色谱法是继气相色谱之后，70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术 适合于高沸点，难挥发，热不稳定物质，离子型化合物，高聚物，生物大分子等的分离和分析； 高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法 是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决所面临的各种实际分离分析课题必不可缺少的工具。 液相色谱与气相色谱的比较 液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。 液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。 但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相，而液体和气体的性质不相同； 此外，液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定差别，主要有以下几方面： 应用范围不同 1. 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。致使其应用受到一定程度的限制，据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析； 2. 液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物的70 ~ 80% 分离效率和因素不同 ① 气相色谱