细胞生物学实验指导详解.doc

《细胞生物学借用目镜测微尺和镜台测微尺测量。测微尺分物镜测微尺（简称物微尺或台微 尺）和目镜测微尺（简称目微尺），两者配合使用，可以测量细胞大小。目微尺是一个可以放在目镜内的特制玻璃圆片，圆片中央刻有一条直线，此线分为若干格。 物微尺为一载玻片中央封固的小尺，长1mm，被等分为100格，长为0.01mm(10μm)。当测量细胞大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用 目微尺。因目微尺测量的细胞是经物镜放大后的像，而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需要先用物微尺来标定，求出某一放大率时目微尺每 格所代表的实际长度，然后再用以测定细胞大小。 将物微尺放在显微镜的载物台上，小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度： 例如：目微尺是100格，其对应的物微尺是80格，则目微尺每格所代表的实际长度为80/100×10=8μm。 测量某一细胞时，如果目微尺测得其横径为5格，则此细胞横径为8×5=40μm。 1、烧杯、吸水纸0.9%生理盐水0.1%亚甲基兰、蒸馏水、香柏油，二甲苯（一）、细胞形态结构的观察：1、涂片法：人口腔上皮细胞的观察：1）在洁净的载玻片中央，滴一滴生理盐水。2）用消毒牙签的一端，在漱净的口腔侧壁上轻轻地刮几下。3）把牙签上附有碎屑的一端，放在载玻片上的生理盐水滴中涂匀。4）用镊子夹起洁净的盖玻片，将它的一边先接触载玻片上的生理盐水滴，然后，轻轻地盖在水滴上。然后在盖片的一侧加一滴0.1%亚甲基兰染液，在盖片的另一侧用吸水纸吸取，染色后细胞核被染成深蓝色，细胞质浅蓝色。 5）用显微镜观察细胞形状，细胞呈扁平鳞状。 2、撕片法：撕一小片植物表皮（洋葱、芹菜和韭菜），放在盛有一小滴蒸馏水的载玻片上，用镊子展平，盖上盖玻片在显微镜下观察。细胞大小和形状如何？ （二）细胞大小的测定： 1、将目微尺放于目镜内。 2、将物微尺放在显微镜的载物台上。 3、小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处。 4、记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度： 目微尺每格所代表的实际长度 = 物微尺格数/目微尺格数 × 10μM 5、将制作的各种细胞临时装片置于载物台上，测定细胞的大小（包括长径和短径）。? 六、注意事项： 1、制作临时装片时避免产生气泡。 2、用物微尺标定的目微尺每格长度的数值代表在某一放大系统下的情况，这一数值会随物镜的放大率而改变，因此，在什么放大倍数物镜下标定的目微尺只能在同一放大倍数的物镜下测定细胞的大小。 五、实验内容 （一）实验器材 1、--詹纳斯绿染液等 （1）Ringer溶液： 氯化钠 8.5g (变温动物用6.5g) 氯化钾 2.5g 氯化钙 0.3g 蒸馏水 1000ml （2）1%、1/3000中性红溶液： 称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热 (30~40℃)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 （3） 1%、1/5000詹纳斯绿B溶液 称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 3、材料 真核、原核细胞涂片或切片，动、植物不同组织的新鲜材料切片。 4、溶液或试剂：香柏油，二甲苯1. 人口腔上皮细胞线粒体的活体染色及观察 实 验 方 法 1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓ 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中 ↓ 染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察 2、植物细胞液泡系的超活染色与观察 取豆芽的根尖 ↓用刀片纵切根尖 放入中性红染液滴中，染色5~10min。 ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检(镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察) 实 验 结 果 在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长