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L．缬氨酸发酵条件优化 李晓华张克旭 陈宁 (天津科技大学食品科学与生物工程学院天津300222) 摘要 以L广缬氨酸高产茵黄色短杆菌TV2564为出发菌株，对摇瓶发酵培养条件如温 度、pH值、供氧等进行了探索。试验结果表明，在最优条件下发酵65h，I广缬氨酸产量可达 45吕／L。溶氧是缬氨酸发酵中非常重要的一个控制参数，在摇瓶最佳发酵条件的基础上，研 究了5升罐溶氧对发酵的影响，提出了分阶段溶氧控制模式。 关键词L广缬氨酸，发酵条件，黄色短杆菌 L广缬氨酸作为分支链氨基酸之一，系人体必须氨基酸，具有多种生理功能， 主要用以配制复合氨基酸输液、合成多肽药物和食品抗氧化剂等。近年来，人们 发现L广缬氨酸是合成免疫抗生素的重要中问体，其年消耗量猛增。关于L缬氨 所【4J以及沈阳药科大学等所报道的有关发酵法生产L广缬氨酸的研究，L广缬氨酸 65h，L-缬氨酸的产量可达459／L。较未优化前产量有大幅度提高。在摇瓶最佳 发酵条件的基础上，研究了5升罐溶氧对发酵的影响，提出了分阶段溶氧控制模 式。 1材料与方法 1．1出发菌株 谢控制发酵实验室保藏菌株。 1．2培养基(∥L) 1．2．1完全培养基：见文献【5]。 1．2．2种子培养基(g／L)： · 85· MgS04‘7H200．4，MnS04‘n20 20min O．75kg／cm2 1．2．3最佳发酵培养基 0．4， MnS04‘H200．01，Ile0．06，Leu0．4，MetO．5，VBl 20min 消)，pH7．0～7．20．75kg／cm2 1．3采用分析方法 1．3．1 pH：采用酸度计测定。 1．3．2菌体生长：吸取样品菌液0．5mt，用蒸馏水稀释20倍，摇匀后测定氏20 值。 1．3．3还原糖：采用SBA-4多功能谷氨酸一葡萄糖分析仪测定。 1．3．4 L广缬氨酸：采用纸上层析法、比色定量法和高效液相色谱法测定。 1．3．5 KLa的测定：采用亚硫酸盐氧化法[6】。 2结果与讨论 2．1摇瓶发酵条件的研究 2．1．1温度对发酵的影响 温度对发酵的影响主要表现在发酵前期影响菌体的生长和在发酵中后期产 酸。如果菌体的最适生长温度与产物形成的最适温度(即发酵温度)不同，则必 须分阶段控制培养温度。由种子温度试验可知，菌株TV2564的最适生长温度为 32。C。因此在32％前后设置了几个不同的温度，以期获得该菌的最适发酵温度， 试验结果如表1所示。 表1温度对L广缬氨酸发酵的影响 由表1结果可知，L广缬氨酸发酵的最适温度为32。C。在此温度下，菌体生长 好，菌浓大，L缬氨酸产量高，糖酸转化率也高。温度太低，菌体生长较慢，难以 完成对原料的转化。温度太高，菌体易衰老，不利于高产I广缬氨酸。 2．2．2 pH控制方式的比较 对摇瓶分批发酵而言，欲控制全发酵过程始终维持某一恒定的pH值是十分 ·86· 困难的。为使发酵过程尽量控制在pH7．0～7．2之间，本试验考察了四种不同控 制pH的方法对L广缬氨酸发酵的影响。方式A添加碳酸钙2％；Ty式B间歇流加 添加碳酸钙又间歇补加尿素。四种不同的控制pH方式对摇瓶L广缬氨酸发酵的 影响见图1。 50 40 3 ＼ 茹30 鬓20 —10 0 方式A 方式B 方式C 万球D