产杀虫活性物质海洋放线菌的筛选和初步鉴定.pdfVIP

疆建凌n 第三届海洋生物高技术论坛 200s．08。19-23 产杀虫活性物质海洋放线菌的筛选和初步鉴定+ 潘云娣杨丈鸽‘候温甫裘迪红 5211) (宁波大学生命科学与生物工程学院宁波31 摘要：从浙江宁波海域的滩涂泥样中分离到54株海洋放线菌，用卤虫液体测定法进行了杀虫活 对卤虫的ID50高达100以上。同时研究了XS9045舌性菌株的形态培养特征和生理生化特征，初 步鉴定该菌株属于链霉菌属。 关键词：海洋放线菌杀虫活性筛选鉴定 微生物药物是天然药物极为重要的组成部分。但是，由于几十年长时间的开发，从陆栖 微生物找到新活性物质的几率越来越小，筛选的难度越来越大。因此，开发生态环境及物种 分布有别J二陆地的海洋微生物资源、寻找新型微生物药物成为研究的必然趋势【la】。而覆盖地 球表面积7l％的海洋是生命的发源地，其生物多样性远远超过陆地，许多海洋微生物能够产 生多种类型的陆生生物所没有的生物活性物质，J司时开发海洋微生物农药具有发酵工艺成 熟，生产成本低廉、无原料力‘面的后顾之忧，具有得天独厚的优势。海洋放线菌是一类特殊 的、具有重要经济价值的微生物。由于海洋环境的特殊性，赋予生活在海洋中的放线菌在生 理性状和遗传背景以特殊性，冈此海洋放线菌必定能产生结构新颖的活性物质。据不完全统 计，近年来50％以上新发现的海洋微生物活性物质是由海洋放线菌这个庞大的分类群产生的 【钔。本文对分离白宁波海域滩涂泥样中的海洋放线菌杀虫活性菌株进行分离与筛选，并对其中 一株高活性菌株进行了初步鉴定，试图为海洋微生物农药的开发利用提供依据和基础。 1材料与方法 1．1样品来源与供试虫源 泥样采自浙江宁波海域奉化、象山、北仑、慈溪等地滩涂。供试虫源为卤虫(Brineshrinp)， 7．5～8．5)28。C活化24h。 购白北京城远水产饵料有限公司。测定时，卤虫卵1j人工海水(pH 1．2培养基 0．59、KN0319、 改良高氏一号培养基(分离培养基)：可溶性淀粉209、NaCl K2HP04．3H200．59、MgS04·7H200．59、FeS04·7H20 7．4～7．6，121℃高抹灭菌20min。 pH 黄豆粉培养基(发酵培养基)：可溶性淀粉209、黄豆粉159、葡萄糖59、酵母膏2．59、 l CaC01 7．5～8．0，121℃高雎灭菌20min。 g、人T海水1000ml，pH +浙江省自然科学暴金资助项目(No．402038) Granted ProvincialNaturalScienceFund(No．402038) Project byZhejiang qel：0574：-m。l ★联系人 i】：yangwengo@nbu．edu．an 133 福建襞n。 第三届毒洋生物育技术论坛 2005。08．19．23 1．3海洋放线菌的分离15] 高氏一号培养基(海水为基质)为分离培养基。使用前加入终浓度为50ppm的重铬酸钾 作为细菌和真菌的抑制剂。取湿泥样3～59，加入无菌海水lOml，激烈振荡后放置澄清，取 适量清液涂布于培养基，于28。C下倒置培养5～7d后挑取单菌落进行纯化。 1．4菌种发酵及发酵液预处理 菌种经斜面活化后，将孢子用无菌水洗下，孢子悬液接种于发酵培养基(250ml锥形瓶 装液量30m1)，28。C 冷冻离心20min，上清液二r一20。C保存备用。 1．5杀虫活性测定 1．5．1初筛采用卤虫液体测定法‘6。7】：在96孔细胞培养板中分别加入0．1ml卤虫液(大约400