亲和毛细管电泳法测定氟喹诺酮类药物与牛血清白蛋白的结合常数.pdfVIP

D07亲和毛细管电泳法测定氟喹诺酮类药物与牛血清 白蛋白的结合常数 刘世旺：张黎伟1张新斧1 1．北京大学化学与分子工程学院，北京100871， 2．湖北黄冈师范学院生物系，湖北黄冈438000 氟喹诺酮类药物是一类含氟的新型合成广谱抗菌药，广泛用于各种敏感菌所致的感染。 血清白蛋白是血浆中含量最丰富的载体蛋白，与内源及外源性物质结合，起到存储与转运的 作用。研究氟喹诺酮类药物与血清白蛋白之间的作用，有助于了解药物在体内的运输和分布 情况，对于阐明药物的作用机制、药代动力学及药物毒性等有非常重要的意义。亲和毛细管 电泳(ACE)是近年发展起来的毛细管电泳的一个分支，在研究药物小分子与生物大分子之 间相互作用方面与传统分析方法相比，具有分析速度快，样品用量少，多种分析模式可供选 mmol／L的 择等优点【lJ。本文采用毛细管区带电泳紫外检测方法，在pH值7．4，浓度50 磷酸盐缓冲溶液下，通过测定在不同浓度BSA的缓冲溶液条件下化合物迁移时间的变 化，分别得到8种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、依诺沙星、氟罗沙星、左氧氟沙星、洛美沙 Serum 星、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星)与，|二血清白蛋白(Bovine 的结合常数，对进一步阐明氟喹诺酮类药物与血清白蛋白的作用提供了理论依据。 7．4，50 流、电压和离子强度等因素的影响，本文最终选择pH mmol／L的磷酸盐缓冲体系。并 以丙酮为中性标记物，分别测定在不同BSA浓度的缓冲溶液条件下8种化合物的迁移时间。为 简化计算，首先建立了一种简单计算模型，即假设化合物与蛋白质的结合比为1：l。将BsA加入 缓冲溶液中，药物样品进样后在毛细管区带中与蛋白质发生相互作用，快速达到平衡并根据 平衡理论和色谱假固定相理论”，得到： k：塞盟(1+Kb[BSA])F (2) 【Q]。o。 和中性标记物的保留时间。根据方程(2)作^一[BSA]图，得直线斜率瘌截距良计算得其结合 常数为氲=a／6。 ‘基金项目：国家自然科学基金瓷助项目(No30370323) edu．cn． 作者简介：张新祥(1966·)，男，教授．研究方向：生化分析．E_mail：zxx@pku 148 眦 ㈣ ㈣ ! ^ 八 YⅢ ^ —i——————A—JL ㈣ 0 一 1 4 ，、 眦 —坠—』—J、————一 Ⅲ 【BSAIxlm 图1．左氧氟沙星在不同BSA浓度的毛细管电泳图 图2t与BSA浓度的线性关系圈 a～g的浓度分别为：0，3．0x10～，6．0×1ff6，9．0xl(Y6， 1．2x105．1．5xlff5，1．8×10-5M 表18种氟喹诺酮类药物与BSA相互作用的结合常数 实验表明，8种氟喹诺酮类药物均与BSA发生一定程度的相互作用，且由于其结构的相似 性，其结合常数均在1