人心肌肌钙蛋白IC融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化.pdfVIP

人心肌肌钙蛋白I-C融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化 闰存玲徐国宾奎夏铁安 (北京大学第一医院检验科，北京100034) l， 【摘要】提取人心肌组织总RNA，RT-PCR扩增出人心肌肌钙蛋白I(cardiac Troponin cTnI)和肌钙蛋白C(TnC)基因，利用人工合成的可编码19个中性氨基酸残基为主的 重组pETl5b质粒转化入大肠杆菌彪刀仍别pLysS中，用异丙基一D—D一硫代半乳糖 苷(IPTG)诱导蛋白表达。结果在大肠杆菌中成功实现了全长eTnI．C融合蛋白 纯蛋白质。经初步研究，cTnI．C具有较好的免疫原性和稳定性，有望成为cTnI测定系 统可溯源的候选参考物质，推进cTnI检测的标准化进程。 【关键词】心肌肌钙蛋白I．C，融合蛋白，表达和纯化 中图分类号R446．1 inEcoliYAN and ofhumancardiac I-C Expressionpurification Troponin Cun-Ling，XU of Medical First University Guo-Bing率，XIATie-An．DepartmentLaboratoryScience，Peking 100034，China Hospital，Beijing and humancardiac fusion in tothe clone I-C [Abstract]To proteinapplication express Troponin controlforcTnIdetection cardiac IandCcDNAswere quality system，HumanTroponin amplified fromhumancardiac fromthe cDNA by usinggene-specificprimersdesigned publishedsequences waslinkedwithTnC a shortDNA the chainraction．The ofcTnl polymerase full-length by 1 aminoacidresidues．An constructforcTnI-CWas for9neutral coding expression sequence the eDNAintoa 5b recombinant engineeredbyinsertingcorresponding pETlplasmid．Then WastransformedintoE．coli Wasinduced