人肝癌细胞BEL7402中热休克蛋白70相伴甲胎蛋白的实验研究.pdfVIP

第21分会场 生物技术产业化407 参考文献 1 白冬梅，等．应用HPLC一反相色谱法测定米根霉乳酸发酵液中的有机酸．工业微生物，2001， 2001，31(1)：8～11 2 毕丽君，顾振宇．固相萃取一反相HPLC分析色酒中的有机酸．理化检验一化学分册，2000，36 (4j：163～165 3 4 辛梅华，等．反相HPLC快速测定调味品中的有机酸．中国调味品，2003，4：36～39 5黄红霞．应用高效液相色谱法快速测定奶粉中的乳糖、蔗糖、葡萄糖．福建轻纺，1999，6：1～3 6邹汉法．高效液相色谱法．北京：科学出版社，1998 7恩格哈特．高效液相色谱法．北京：机械工业出版社，1982 8张玉奎，张维冰，邹汉法．高效液相色谱分析．北京：化学工业出版社，2000 9 汪正范．色谱定性与定量．北京：化学工业出版社，2000 10 张晓彤，云自厚．液相色谱检测方法．北京：化学工业出版社，2000 1l傅若农．色谱分析概论．北京：化学工业出版社。2000 12 于世林．高效液相色谱方法及应用．北京：化学工业出版社，2000 作者简介杨洁，女。新疆大学生命科学与技术学院副教授，硕士研究生导师，长期从事食品化学 王小平1 王巧侠1 董小黎1 杨守京2 刘彦仿2 1．首都医科大学病理学教研室，北京，100054； 2．第四军医大学病理学教研室，西安，710032 摘 要 相互作用，采用免疫化学和免疫荧光检测HSP70和AFP在肝癌细胞中的表达和定位。 HSP70与AFP的相互关系通过免疫共沉淀和蛋白印迹杂交进行分析。结果免疫化学显示人 HSP70单抗的免疫沉淀中，而HSP70则存在于AFP单抗的免疫沉淀中。结果表明人肝癌细 胞BEL一7402中HSP70与AFP相伴。两者之间的相互关系研究将成为探讨肝癌的发生和免 疫治疗的新途径。 关键词 细胞病理学 热休克蛋白70(HSP70) 甲胎蛋白(AFP)肝细胞癌 一、前言 甲胎蛋白(AFP)是由胚胎肝细胞、卵黄囊和胚胎消化道微量合成的主要血清蛋白。在胎儿体内 408 以科学发展观促进科技创新(]、) AFP以维持渗透压和载体蛋白方式发挥作用，并通过免疫抑制调节免疫系统，例如阻止母体免疫系统 对胎儿的免疫攻击。AFP在成人血清中的再现通常是病理状态的信号，特别是提示肝细胞癌(HCC)和 含有卵黄囊残余细胞的生殖细胞肿瘤。现在AFP已经被成功用于肝细胞癌的诊断和预后指标。尽管 AFP的功能已经开展了许多研究，但是它的生物功能仍然是一个待解之谜。 热休克蛋白(HSPs)作为分子伴侣，参与细胞生长、凋亡、蛋白分子稳定和胞内多肽靶载体的生化调 节剂效应。肿瘤细胞生长过程中HSPs的上调表达与细胞的增殖密切相关。有意义的是一些研究表明 胞生长和分化过程中，HSPT0和AFP的表达存在可能的联系。本次研究，利用免疫细胞化学和免疫共 癌的发病机理和免疫治疗提供了思路。 二、材料和方法 (一)试剂 (二)细胞株和细胞培养 1640 人肝癌细胞株BEL一7402由中国医学科学院肿瘤研究所提供。获得的细胞株培养于RPMI 培养液，内含10％灭活的胎牛血清，50 7402细胞于6孔培养板中，培养24h；然后PBS清洗细胞，在皿孔中加入2mL 50％冷甲醇／丙酮溶液， 4C固定20min，PBS洗涤后，室温干燥备用。 (三)免疫细胞化学 所有皿孔细胞酒精逐级水化，以0．3％H202一甲醇溶液室温条件下封闭内源性过氧化物酶30min。 将培养板浸浴于柠檬酸盐缓冲液中采用微波修复抗原10 min。然后分别加入兔抗人HSP70抗体或小鼠抗 显色8min，漂洗后苏木素套染胞核，脱水，风干，粘片。小鼠抗人HSA抗体替代一抗作为阴性对照。 (四)间接免疫荧光细胞化学 所有皿孔细胞酒精逐级