七种观察方式答案.ppt

显微观察方式 观察方式 1.明场观察 2.暗场观察(暗视野) 3.相差观察(相衬观察) 4.偏光观察 5. DIC观察(微分干涉) 6. RC观察(浮雕相衬) 7.荧光观察 (一)明场观察方式 明场观察显微镜的调节 瞳距调节 屈光度调节 光路转换 聚光镜中心 孔径光栏设置 瞳距调节 屈光度调节 光路转换 聚光镜中心调节 孔径光栏调节 孔径光栏开度与图象 (二)暗视野观察方式 4 应用：微小粒子、细菌形态观察、细菌记数，透明标本观察等 （三）相差观察方式 (三)相差观察方式 (三)相差观察方式 (三)相差观察方式 （四）偏光观察方式 （五）微分干涉（DIC）观察方法 （五）微分干涉观察方法 （六）浮雕相衬显微镜 2. 历史 1975年，Robert Hoffman 博士发明 2002年，专利到期，各显微镜厂家纷纷推出采用以自己名义命名的RC技术产品 3. 特点 提高未染色标本的可见性和对比度； 图象显示阴影或近似三维结构而不会产生光晕； 可检测双折射物质(岩石切片、水晶、骨头) ； 可检测玻璃,塑料等培养皿中的细胞,器官和组织； 聚光镜的工作距离可以设计的更长； RC物镜也可用于明场,暗场和荧光观察 4. 缺点 观察效果与标本方向密切相关 操作较复杂 必须有多元件,结构复杂的高数值孔径RC物镜 观察荧光效果不如明场物镜 5. 应用 所有类型的细胞，组织（无论活体，染色，未染色），晶体表面细节，透明聚合物，玻璃和其它类似材料，尤其适用于显微操作 荧光观察方法 什么是荧光 ? 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是非温度辐射光——冷光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。 显微镜荧光利用光源激发——光化荧光 荧光的种类自发（固有）荧光 二次荧光 荧光显微镜的作用原理 荧光的性质 荧光显微镜的优点和用途 荧光显微镜的种类 透射式 荧光显微镜的种类落射式 荧光显微镜的主要部件 透射式 吸收滤色镜 暗场聚光镜 激发滤色镜 汞灯光源 落射式 吸收滤色镜 分光镜 激发滤色镜 汞灯光源 落射荧光显微镜的构造 落射荧光显微镜的构造 荧光显微镜光源 荧光显微镜激发透镜组 落射荧光显微镜各部件特性和作用 落射荧光显微镜各部件特性和作用 滤色镜的选择 带宽对图象的影响 多重染色标本的多色观察 三色滤色镜的特性曲线 双重染色标本的单色和双色观察 单色滤色镜的特性曲线 双色滤色镜的特性曲线 现行显微镜特点和各种滤色镜 自由组合 激发块 油镜应使用荧光油 物镜光栏的运用 荧光的衰减 防衰减的方法 使用抗衰减剂 选择衰减小的荧光素 降低激发光强度 降低标本中氧的浓度 使用抗衰减剂的效果 汞灯灯箱构造 汞灯中心调节方法 放置荧光调中板或一张白纸于载物台上 转入B或G激发滤色镜 用10X物镜观察并聚焦 取下10X物镜 通过汞灯箱上聚焦旋钮聚焦汞灯电极于白纸 通过汞灯箱上下、左右旋钮调汞灯电极中心于白纸上圆环中心 1.明场观察——常规染色片（HE染色等） 2.暗场观察——微粒外观（细菌记数等） 3.相差观察——活细胞标本（细胞培养、 膜片钳等） 4.偏光观察——双折射物质（晶体检测） 5. DIC观察——活细胞等（细胞培养，显 微操作等） 6. RC观察 ——显微操作 7.荧光观察 ——物质鉴定（抗体、抗原、荧光原位杂交FISH等） 宽谱线发射光（汞灯） 滤掉其他光，透过激发光 激发滤色片 吸收滤色片 滤掉激发光，透过荧光 标本受激发产生荧光向四周发散 激发光受反射、折射或衍射向四周发散 吸收光，必需有激发光源 荧光波长＞激发波长（损失热能） 荧光强度极小于激发光的强度 有不同程度的衰减 荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率 优点： 检出能力高（放大作用） 对细胞的刺激小（可以活体染色） 能进行多重染色 用途： 物体构造的观察——荧光素 荧光的有无、色调比较进行物质判别——抗体荧光等 发荧光量的测定对物质定性、定量分析 吸收滤色镜 激发滤色镜 汞灯光源: 提供激发光(U、V、B、G) 氙灯光源： 高峰值更宽，更稳定 激发滤色镜: 激发波长选择 激发透镜组 （激发块）: T% nm BAND PASS 入射光 发射光 激发 滤色镜 分光 滤色镜 吸收 滤色镜 吸收滤色镜: 荧光透过,阻挡杂光 分色镜: 反射激发光,荧光透过 ＞A 透过 A ＜A 反射 B ＞B 透过 ＜B 阻挡 nm nm T% T% A 吸收滤色