基于硫堇衍生化自组装膜的丙肝电化学免疫传感器.pdfVIP

第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 C电化堂皇塑堡壁曼兰竺塑坌堑些兰 ／ c幽 基于硫堇衍生化自组装膜的丙肝电化学免疫传感器 邹小勇 李敏健1，2刘仲明2蔡沛祥’1 (I．中山大学化学与化学工程学院，广州510275) (2．广州1军区广』、I1总医院医学实验科，广州510010) 丙型肝炎属于高危疾病．目前用于检测丙肝病毒(HCV)的主要方法有血清学非 特异反应【I】，酶联免疫分析法(ELISA)t舶、重组免疫印迹【l】、聚合酶链反应【3】等，这些 方法虽然灵敏度较高，技术也比较成熟，但繁琐，容易污染．电化学免疫传感器具有 免疫反应的高选择性和电化学分析的高灵敏性，且检测时间短、操作简便．综观国内 外研究现状，尚未见关于丙肝电化学免疫传感器的报道．生物分子的固定化技术是 免疫传感器成功的关键．本文以HCV为检测对象，以金电极为基础电极，利用硫堇 的电化学活性和辣根过氧化酶对硫堇的催化还原作用【4J，采用自组装单分子膜技术 成功研制了电流型丙肝免疫传感器． 1实验部分 1．1电极的预处理：金电极(由2 min，水洗后在0．3及0．05 mm)经Piranha溶液浸泡15 u min，氮气干燥． mAl203糊上打磨抛光，依次在双蒸水和无水乙醇中超声清洗5 1．2传感器的制备：将经过预处理的金电极置于MPA溶液(中=99％)浸泡1h，水洗 后置于100 EDC和100 h，水洗后 mg／mL mg／mLNHS的混合溶液(体积比1：1)活化1 再置于4．5 恒温37℃，制得丙肝免疫传感器． min 1．3免疫反应：在传感器表面滴加4“L受检的HCV抗原溶液，恒温37℃静置10 后水洗晾干待测． 1．4伏安法检测：以传感器为工作 eO 电极，饱和甘汞电极为参比电极， 6．0 《 乏Io 铂丝电极为对电极，H202．PBS溶液 o 詈2 蟋 (pH--7．4)为测试底液．采用循环伏 鬈 o 安法和线性扫描伏安法研究传感器 的电化学特性；采用线性扫描伏安 法对HCV抗原进行定量检测． n10 0 -010 ·O20 -O．30 -0柏 ．O∞ -0柏 峰电位EvlV 2结果与讨论 图1 丙肝免疫传感器对丙肝核心抗原的响应 2．1传感器的电化学特性：丙肝免 a：免疫反应前：b：免疫反应后 疫传感器在H202．PBS缓冲溶液中 有一对硫堇的氧化还原电流峰，是硫堇的1个-NH2基团以酰胺键共价键合在电极表 面后产生的氧化还原峰．扫描速度V在0．01～0．4V／s的范围内，阴极峰电流k与v 176 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 C电化学生物传感器与生物分析化学 呈线性关系，表明传感器中电活性物质的氧化还原过程具有明显的表面反应特征． 2．2传感器对HCV抗原的响应：HCV抗原与HRP酶标抗体免疫反应后，硫堇的氧化 还原峰发