基于苯硼酸二醇识别的糖响应性囊泡的研制.pdfVIP

基于苯硼酸／--醇识别的糖响应性囊泡的研制 王秋生，李广全，于景生，奎垦望 (吉林大学超分子结构与材料教育部重点实验室，长春，130012) 糖是生物体内能量的传递物，是维持细胞生存的关键。如果糖的传递被破坏，刚直 接导致某些疾病如糖尿病发生，因此糖和单糖浓度梯度的原位监测对人体疾病的诊断与 治疗是极其重要的，也是通过跟踪监测血糖浓度的变化来控制糖尿病的重要挑战之一。1 血糖的监测通常是针刺取样，这种跟踪血糖途径即不方便，又不连续。只有连续跟踪监 测血糖浓度的变化，才能获得糖尿病患者血糖的即时反馈，及时帮助患者把血糖控制在 适当的浓度范围。2因此，建立连续踞踪监测葡萄糖的体系近来成为人们最感兴趣的研发 课题。为此，研发长期与血液接触并能给出葡萄糖浓度连续数据的监测体系具有重要的 理论意义和实际应用前景。 化学监测器或传感器在这方面具有独特的功效，已经有些公司正在进行试验，如药 物传感器。为了发展基于连续监测装置的化学传感器，特别是具有高选择性和适度的亲 合性的葡萄糖传感器，是具有广阔实际应用前景的技术。硼酸与含高亲合性的二醇化含 物如糖可以形成可逆硼酸脂，这种通过共价结台并选择性识别葡萄糖的功能基团，可以 用作核苷和糖类传递物3。我们知道激发态质子从茜素红的苯羟基转移到酮氧键导致茜索 红S(ARS)的荧光淬灭4，当茜素红S与苯硼酸(PBA)形成苯硼酸脂导致体系的荧光增 强’，而茜素红与苯硼酸在同样条件下，可以形成更稳定的苯硼酸糖脂。因此，在ARS、 苯硼酸和葡萄糖三组分体系内，存在二个竞争平衡，利用茜素红形成硼酸脂后的荧光变 化，可以检测出体系的二个竞争平衡反应。 ammonium trimethyl bromide，DBBTAB)o是阳离子双亲化合物，在稀溶液中可以形成双 分子层排列的囊泡，与细胞膜的骨架结构相似；茜素红s是磺酸盐，通过静电相互作用 可以与DBBTAB分子键合在囊泡表面。因此，可以把DBBTAB囊泡，茜素红S混和囊泡 作为监测葡萄糖的载体。利用茜素红在形成脂前后荧光发生变化这一特点，我们设计了 一个可以识别葡萄糖的混和囊泡的三组分监测体系，使囊泡通过茜素红s结合的苯硼酸 和糖结合后，可以通过茜素红S的荧光变化来连续监测。 双亲化合物DBBTAB6、茜素红S的化学结构如图I所示。 CH3(CH2)uO弋(卜(Cn2hN*(CHg，Br 图14-(4’-十二烷氧基-4-联苯氧基)丁基三甲基演化铵(DBBTAB)和茜素红S的化学结构 将DBBTAB、茜素红和苯硼酸溶于磷酸盐缓冲溶液(PH=6．86)中，分别配制成 资助。 297 硼酸按80：I：7的摩尔比例混合，超声波震荡器震荡2小时，形成混和囊泡(coliposomes)， 用HITACHI8200透射电镜观测混和囊泡的形态，由电镜估计出囊泡的直径约为100--300 ilmo 将PBA缓冲溶液滴加到DBBTAB／茜索红s混和囊泡中，震荡混匀，静置约4小时 后，用468nm光激发，测定混和囊泡体系的荧光光谱，发现565nm的发射谱随着苯硼酸 的浓度增加而逐渐加强，图2。结果表明PBA与键合在囊泡表面的茜素红s形成了苯硼酸 脂。苯硼酸脂的形成，使茜素红s的荧光强度增强。 匀后，测定混和囊泡体系的荧光光谱，发现565nm的发射谱随着葡萄糖的浓度增加而逐 渐降低，如图3所示。混和囊泡体系的荧光强度随葡萄糖的加入逐渐降低，表明葡萄糖 已经把茜素红s置换出来，生成苯硼酸葡萄糖脂，其结果导致茜素红s的荧光强度随着 苯硼酸茜素红脂的减少而逐渐降低。图3的荧光光谱的变化正表示了这一变化过程。综 合图2和图3的荧光变化，表明在DBBTAB／茜素红肥嗍萄糖混和囊泡体系存在二个 平衡，如图4所示．即茜素红与苯硼酸形成茜素红脂使 图2：DBBTAB(8×101moll．】)，茜素红 S(1×104t001．1。)按伴积比I：l混和囊泡． 逐渐加入苯硼酸(1×l酽oll_I)，荧光强度 逐渐变强。 图4苯硼酸同茜 素红s和葡萄糖竞 争键合成苯硼酸脂