微胶囊用于肝细胞聚球体三维培养的研究.pdfVIP

微胶囊用于肝细胞聚球体三维培养的研究 黄晓波，张英，刘洋，王为，马小军 (中国科学院大连化学物理研究所,辽宁大连116023) 摘要： 背景：肝细胞是一种对周围微环境依赖很强的细胞，离体后便很快失去了功能，但如果将其聚集形成细胞 聚球体，便可以继续维持其活性和功能，与传统的贴壁培养相比，肝细胞聚球体能维持较长时间的活性和 较高的细胞功能，这主要得益于细胞间彼此的紧密联系，以及趋于类组织化，其功能更接近于在体肝脏。 近些年来，微胶囊作为一种细胞聚球体的培养方式在肝细胞组织工程的研究中效果显著，在微胶囊的三维 微环境中，细胞聚集成团，并呈三维模式生长。那么，在微胶囊内的微环境究竟会如何影响细胞聚球体呢？ 本文旨在考察微胶囊内海藻酸钠对细胞聚集成团及生长的影响。 目的：在液化核心的海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠（APA ）微胶囊内，以肝癌细胞系HepG2 为模型，考察 微囊内海藻酸钠对肝细胞聚球体的形成及生长的影响。 方法与结论：通过显微观察，考察细胞在微囊内的聚集及生长过程，通过 MTT 试验考察微囊内细胞的活 性变化。微囊内，海藻酸钠阻碍了细胞聚集成团的过程，也阻碍了细胞的生长增殖，随着其黏度和浓度的 增大，限制作用越明显。 关键词：组织工程 微胶囊 细胞聚球体 海藻酸钠 １引言： 膜内的液态环境，微囊膜将细胞阻隔在囊内液态的 自从Holtfreter 首次将胚胎干细胞进行聚集培 环境中，而培养及的营养成分以及小分子物质则可 养后，细胞三维培养技术便被广泛地用于生物研究 以自由通过微囊膜进行物质传递，其主要功能是保 的各个领域[1,2]。与传统的单层细胞培养相比，细 护膜内细胞和控制物质通过微囊膜的传递，每个微 胞聚球体内的细胞无论是在形态还是功能上都更 胶囊就如同一个微小的生物反应器，可方便地进行 类似于体内组织，基于此，细胞聚球体作为一种模 培养、移植和冷冻保藏。近些年来，微胶囊在肝细 型被用于癌症治疗、高通量药物筛选以及组织工程 胞培养及组织工程的研究中效果显著，它为肝细胞 的研究[3-6]。 提供适宜的生长微环境，液态空间内细胞呈三维模 许多种类的细胞可以通过以下手段形成细胞 式生长，形成一个或多个细胞聚球体，细胞彼此联 聚球体，如：在无贴附或持续搅拌的环境下、在悬 系紧密，趋于类组织化，其功能更接近于在体肝脏 滴内、三维支架、以及微胶囊等[7-10]。生物微胶 [11]。那么，微胶囊的微环境究竟会对细胞产生什 囊作为一种技术手段在生物医学领域发挥着重要 么样的影响？ 的作用，它的典型特征是具有一层半透的微囊膜和 本文旨在考察微胶囊内海藻酸钠对细胞聚集 成团及生长的影响。 利用MTT 法测定细胞的生长曲线，微囊化肝 2 材料及方法 细胞接种于24 孔板中，加入含 10％新生牛血清的 2.1 材料及细胞 培养液，每孔总体积2 ml 。每天取样测定，每孔加 海藻酸钠(Alginate 大连海藻工业公司) ；聚赖 入5 mg/ml 的MTT 溶液100 μl，继续培养24 小时， 氨酸Polylysine , Mw 20,900 Sigma ）；氯化钙（沈 筛网过滤收集微胶囊，用1ml DMSO 溶解蓝色结晶 阳试剂五厂 分析纯）；氯化钠（天津市大茂化学 甲臜，吸取150μl 该溶液到96 孔板中，测定OD570 ， 试剂厂 分析纯）；柠檬酸钠（天津市化学试剂一 余下方法同前，四个重复，每 24 小时换新鲜培养 厂 分析纯）；MEM/EBSS 培养液（Hyclone 公司）； 液。 青霉素和链酶素（华北制药股份有限公司）；胰酶 3 结果与讨论 （Amre