RNA的防护：CRISPRs保护原核生物免受移动基因元件精编.doc

RNA的防护：CRISPRs保护原核生物免受移动基因元件 （第2组翻译人员：黄亚宁，李淑娟 字秋艳，陆晓媚 ，匡双便，徐蕾 ） 摘要：在原核生物中CRISPR/Cas 体系提供了对入侵病毒和质粒的抗性。在机制中有三个明显的阶段已经被识别。首先，入侵的片段DNA作为间隔区(spacer)整合到重复的CRISPR位点。随后，CRISPR被转录，而转录物被Cas蛋白反复地裂开，生成短包的RNA（crRNA），crRNA含有spacer序列。最后，crRNA指导Cas蛋白机械mechiery到互补的入侵目标，或是DNA或是RNA，从而抑制病毒后质粒的增值。这篇文章，我们讨论了现在已经了解到的这种神奇的具有遗传性的防御系统，并描述与真核生物中RNAi功能的相似性和区别。 大纲： 1 引言 2 CRISPR位点和Cas基因 3 作用方式 4 与真核生RNAi的类比 5 结论 参考文献 1 引言 通过有移动遗传元件的基因材料的连续性交换，来显著地影响到质量和数量的微生物的进化。病毒存在于地球上大多数丰富的实体中（Bergh等人1989；Wommack和Colwel等人2000），他们通过一系列的活动来进行扩增：病毒吸附到宿主的细胞壁，穿过细胞膜注入病毒基因组（DNA或RNA），病毒基因组的表达，病毒基因组的复制以及病毒蛋白衣的组装，最后是子代病毒的释放（Sturino 和 Klaenhammer，2004）。质粒是另外一种独立的可移动元件。质粒进入到宿主寄主后，或是游离在细胞质或是作为宿主基因组的整合序列。质粒可以通过结合作用从供体细胞转运到受体，利用专用的转移系统（Llosa等人。2002）。 尽管偶然功能的获得是水平基因转运的结果，与可移动元件的重组也可以引起严重破坏（或是结构上的破坏或是宿主基因组的调控区域导致的功能丧失）。另外，噬菌体感染可能最终导致宿主细胞的裂解。为了避免这些有害的影响，复杂机制进行演变从而防御宿主生物体核酸受可遗传性元件的入侵。几种防御系统已经认识了，原核生物中的免疫系统与真核生物有很大不同。一个被动式防御机制可以作用在病毒粒子吸附的水平或是注入它的遗传物质。宿主中病毒受体蛋白的自发突变可以扰乱病毒的附着和遗传物质的注入，但不应先感到宿主的健康，比如说，但大肠杆菌的麦芽糖孔蛋白使用λ-噬菌体（197）。而众所周知的主动防御机制是限制性-修饰（R-M）系统。专一的甲基化转移酶类修饰了宿主DNA中可能破裂的位点，防止被限制酶解链。引入外来的DNA缺乏这些修饰，因此可以被内切酶有目的的消化（回顾, Tock和Dryden，2005）。额外的作用机制呈现了与真核生物细胞凋亡的功能相似性，这个机制是原核生物失败的感染机制（Abi）。这个机制抑制噬菌体的增值，或是通过阻塞噬菌体的复制机构或是通过抑制宿主的翻译。这个结果是宿主和病毒都死亡，它们的牺牲保全剩下的躯体（Chopin等人。2005）。 近年来，另外一个防御机制已经被发现，这个机制是基于集群规律性穿插短回文重复序列（CRISPRs）和CRISPR关联的基因（cas基因）。CRISPR/Cas体系可以将来自入侵的可移动元件的核酸片段整合到短的成熟RNAs（crRNAs）.这些crRNAs特定地指导Cas的蛋白机构到它们互补的目标：或是来自侵入的病毒或质粒的DNA或是RNA。因此，CRISPR/Cas体系可以提供宿主获得可遗传的抗性（回顾Sorek等人。2008; 先人Oost等人。2009; Horvath和Barrangou 2010; Karginov和Hannon 2010;Marraffini和Sontheimer2010a）。这篇文章，我们叙述了CRISPR/Cas体系作用机制的特征，并讨论了与真核生物RNA干扰的相似处和不同之处。 2 CRISPR位点和Cas基因 CRISPRs在1987年首次发现，当一个来自大肠杆菌K12的染色体片段被测序（Ishino等人。1987）。从那以后，许多CRISPR序列在真核生物中被识别（概述看：http://crispr.u-psud.fr/crispr/CRISPRdatabase.php）。CRISPRs中48%的细菌组的序列已经被检测出，其中95%的序列为古细菌的基因组。 CRISPRs由一簇相同的重复序列组成，这些序列被不全相同的相似长度的间隔序列分开（见后面的讨论）。CRISPR的排列常常是在前面的是多达500个碱基对的富含AT的引导肽序列（Jansen等人。2002）。每个基因组CRISPR位点的数量冲1到20，长度变化从很小到上百的重复间隔对。目前最长记录是绿弯菌属的CRISPR