1.1：DNA重组技术的基本工具规范.ppt

(1)种类： (2)作用部位： E.coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 DNA片段末端之间“形成磷酸二酯键” 2、 DNA连接酶——“分子缝合针” （黏性末端） （黏性末端和平末端） E·coli DNA连接酶 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4DNA连接酶 T4 DNA连接酶把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 DNA聚合酶与DNA连接酶 相同 区别 DNA聚合酶 DNA连接酶 在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来 将两个DNA片段连接起来； 将DNA双链上的两个缺口同时连接起来 形成磷酸二酯键 3、载体——“分子运输车” （1）载体的作用： 将 转移到受体细胞中去。 目的基因 （2）常用的载体类型： 细菌细胞质的质粒(最常用“大肠杆菌”的质粒) λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？ 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如氨苄青霉素抗性基因，可作为筛选重组质粒的标记基因。质粒的存在与否对受体细胞生存没有决定性作用。 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并且具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 质粒是基因工程最常用的载体 导入 扩增 （3）作为运载体必须具备的条件 能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存。 具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 必需是安全的，不会对受体细胞有害。 注意：真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 课堂巩固 2、DNA连接酶催化的反应是( ) A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键 B．黏性末端碱基之间形成氢键 C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接 D．A、B、C都不正确 C D 3、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是( ) ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质 ⑤是环状RNA ⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A、①③⑤⑦ B、②④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦ C 4、在受体细胞中能检测出目的基因是因为( ) A、目的基因上有标记 B、质粒具有某些标记基因 C、重组质粒能够复制 D．以上都不正确 5、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶 是( ) (1)限制酶(2)连接酶 (3)解旋酶(4)还原酶 A、(1)(2)(3) B、(1)(2)(4) C、(1)(2) D、(1)(3) B C 6.右图为DNA分子的切割和连接过程。 (1)EcoRI是一种 酶，其识别序列是 ， 切割位点是 与 之间的 键。切割结果产生的DNA片段末端形式为 。 (2)不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是 连接酶，此酶的作用是在 与 之间形成 键，而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是 。 限制酶 GAATTC 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌吟脱氧核苷酸 磷酸二酯键 黏性末端 E.Coli DNA 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌吟脱氧核苷酸 磷酸二酯键 T4DNA连接酶 * * * 专题1 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 复习：基因 概念：基因是有遗传效应的DNA片段，是生物体遗传的结构单位和功能单位。 特点：独立性，可以“剪切”和“拼接”。 作用：控制生物性状，指导蛋白质的生物合成。 复习：核酸 脱氧核糖核酸(DNA) 核糖核酸(RNA) 基本单位： 脱氧核糖核苷酸（4种） 核糖核苷酸（4种） 类型： 碱基种类： A、G、C、T 基本单位： 碱基种类： A、G、C、U 概念：是细胞内携带遗传信息的物质，在生物体的遗传、变异和蛋白质的生物合成中具有极其重要的作用。 A G C T 氢键 A T G C 平面结构 立体结构 DNA分子的结构 DNA的复制 生物性状多样性的来源 基因突变： 缺点：不定向性，低频性、多害少利性 基因重组： 获得多种性状组合 缺点：只限同种生物，不能克服远缘杂交。 获得新性状 定向改造生物设想 设