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玉米愈伤组织诱导影响因素的研究进展 　　摘 要：在玉米组织培养中，愈伤组织的诱导率受多种因素的影响。本文结合相关文献资料，综述了基因型、外植体种类、培养基种类、生长调节物质、温度及光照等因素对玉米胚性愈伤组织诱导率的影响，旨为玉米遗传转化受体系统的开发和利用提供重要的参考价值。 　　关键词：愈伤组织；外植体；基因型 　　中图分类号： S513 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20161131018 　　近年来，遗传转化技术在玉米育种中取得了一定效果，为玉米育种工作创造了新途径，而进行玉米遗传转化的基础工作是建立高效的遗传再生体系。自1975年，研究者首次以玉米幼胚为材料诱导出愈伤组织并获得再生植株以来[1]，玉米组织培养研究得到迅速发展。大量研究表明，在玉米遗传再生体系建立过程中，胚性愈伤组织的形成及生长状态受多种因素的影响。 　　1 基因型对玉米愈伤组织诱导的影响 　　基因型是影响玉米胚性愈伤组织诱导率的主要因素。胡建广等[2]研究表明，采用不同基因型玉米自交系，幼胚的愈伤组织诱导率和发育情况均不同，同时认为自交系的诱导性是可以遗传的。Hodges等[3]研究发现玉米自交系A188的再生能力最高，并且它的杂交后代也具有较高的愈伤组织诱导率。母贵琴等[4]研究发现，7个玉米78599选系均具有胚性愈伤组织发生能力，但由于基因型不同，其幼胚培养能力也不同。目前仅有少数玉米基因型能够诱导产生质量、状态较好的胚性愈伤组织，而很多基因型产生的愈伤组织质地柔软、水浸化，继代后逐渐褐化死亡。玉米基因型不同，分化长成植株的难易程度也不同。即胚性愈伤诱导率高的基因型其愈伤组织克隆能力和分化能力较强。 　　2 外植体对玉米愈伤组织诱导的影响 　　2.1 幼胚 　　玉米幼胚的取材虽受季节和发育阶段的限制，但其具有接种方便、诱导率高，愈伤组织质量好，易分化成苗等优点，因此是遗传转化的首选材料[5]。黄璐等[6]试验发现玉米幼胚诱导愈伤组织及再生植株的能力明显高于幼穗。王昌涛等[7]以不同外植体进行愈伤组织诱导发现，幼胚的胚性愈伤诱导率最高。曹俊梅等[8]分别以幼胚和成熟胚为外植体进行诱导研究表明，幼胚诱导的愈伤组织质量较好，分化率较高。 　　玉米幼胚愈伤组织的诱导率还受胚长的显著影响。幼胚过小（2mm），易形成胚芽，且愈伤组织在继代中增殖能力较差。李慧芬等研究认为玉米幼胚大小为1.2～1.5mm时较适宜接种，诱导产生的愈伤组织为Ⅱ型胚性愈伤组织，且诱导率较高。 　　2.2 成熟胚 　　在玉米组织培养中，有关成熟胚的组织培养技术报道较少。以成熟胚作为外植体诱导愈伤组织，取材时不受季节限制，且操作过程简单，不易污染；但存在诱导率低、愈伤组织质量不稳定等缺点，所以在成熟胚的利用上受到一定限制[9]。 　　1974年Green等首次使用玉米成熟胚诱导出愈伤组织，为玉米成熟胚的研究奠定了基础。1987年Wang[10]使用玉米自交系B73和Mo17的成熟胚诱导愈伤组织，获得再生植株。2004年Huang等[11]分别对7个玉米基因型的成熟胚进行愈伤组织诱导，初步建立了成熟胚途径的玉米遗传再生体系，并获得较高的植株再生率。因此，应加大力度进行玉米成熟胚的研究，以成熟胚为外植体进行愈伤组织诱导一旦取得成功，将会大大加快实验进程。 　　2.3 茎尖 　　玉米?o尖培养开始于20世纪40年代，现己得到广泛应用。茎尖的产生依赖于成熟种子，因此，同样具有取材方便，不受季节限制的特点[12]，并且胚性诱导率受基因型的影响较小。李学红等[13]研究显示，由玉米茎尖可诱导产生愈伤组织，并且具有较高的胚性诱导率。但茎尖培养仍有缺陷，王昌涛等（2005）[14]研究表明，茎尖培养能够产生胚性愈伤组织，但愈伤较小，生长缓慢，并且操作过程复杂。因此，直接以茎尖作为受体材料进行玉米遗传转化的研究将受到重视。 　　2.4 叶片 　　以玉米幼苗的幼嫩叶片为外植体进行组织培养不受时间限制，可随时大量取材。 Ahmadabadi[15]等以玉米Pa91×H99的幼苗叶片为外植体进行愈伤诱导，成功诱导出胚性愈伤组织，并再生植株。董浩[16]等研究表明，玉米的幼嫩叶片可以成为愈伤组织诱导的起始材料，并且玉米叶片生长部位不同，其愈伤组织的形成能力也不同，即基部切段愈伤组织形成率高，愈伤组织质量较好；而中部和上部愈伤组织形成能力较低，继代后易褐化、水样化而死亡[17]。陈靖等[18]以6种不同基因型的玉米叶片作为外植体进行愈伤诱导发现，来源于幼苗基部的幼嫩叶片能提供较多的材料，且操作简单易行。张东向等[19]研究也证实了以上结论，同时认为采用2mg/L 2，4-D 与0.5mg/L 6-BA的组合有利于叶片胚性愈伤组织的诱导。 　　3