橙皮苷酶和柚苷酶的发酵条件研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨论会论文集 橙皮苷酶和柚苷酶的发酵条件研究 曹小燕 汪 钊。 (浙江工业大学生物与环境工程学院，杭州310014) 摘要：优化黑曲霉变异株Aspergillusnigerwz001的液态培养条件，选择麸皮为碳源，加 量为1％，豆饼粉为氟源，加量为1～3％，磷酸盐选择(NH．)HzPO(．经优化，橙皮苷酶和柚 苷酶的酶活分别达到988．4U／ml和992．6U／ml，分别提高41％和46％。 关键词：橙皮苷酶；柚苷酶；液态发酵 橙皮苛和柚皮苷分布广泛，具有抗癌，增强人体免疫功能等作用[1]，然而它们的水溶 性和吸收性都较差，所表现出的药理作用也相对较弱，橙皮苷还会引起桔子罐头白点的 产生，柚皮苷是柑桔的主要苦味物质。橙皮苷酶和柚苷酶可分别水解橙皮苷和柚皮苷， 得到橙皮素单糖苷、柚皮素单糖苷、橙皮素、柚皮素等r21，橙皮素单糖苷是一种超级甜味 剂的前体，还具有较强的抗感冒病毒的活性；橙皮素具抗氧化、抗肿瘤等功效；柚皮素单 糖苷可作为药物原材料，用来合成各种化学医用药物；柚皮素具有抗菌、抗炎、抗癌、解痉 和利胆作用[3]。然而国内目前还未能购买到橙皮苷酶和柚苷酶的商品酶制剂，国外虽然 已有该商品酶制剂上市，但酶活较低，价格昂贵“]。此外，国内外还尚未有能同时产橙皮 苷酶和柚苷酶的菌株报道。本文采用实验室筛选的黑曲霉变异株Aspergillus niger wz001，该菌株在一定条件下发酵，能同时产橙皮苷酶和柚苷酶两种酶，研究不同的发酵 条件与产酶的关系，寻求适于制备橙皮苷酶和柚苷酶的优良培养基配方及培养条件，使 橙皮苷酶和柚苷酶的酶活能有较大的提高。 1 材料与方法 1．1基本培养基 1．1．1斜面种子培养基采用查氏培养基Csl。 1．2发酵“·7】及粗酶液的提取 60ml，接人5％种子液，灭菌接种，36℃，180r／rain摇床培养5天，测定酶活。 1．3橙皮苷与柚皮苷的检测方法[，】 反相高效液相色谱法(HPLC)，采用Agilent的ZORAXSB-C18，流动相为甲醇t水 =55：45，流速lmL／min，检测波长283nm。 1．4橙皮苷酶与柚苷酶的酶活定义 在45℃、pH4．5的条件下，每分钟转化1微克底物所需的酶量为一个酶活力单位 (U)。 曹小燕等：橙皮苷酶和柚苷酶的发酵条件研究 389 2结果与讨论 2．1碳源的选择 根据文献报道以及实验室现有条件，选用几种常见的碳源，分别为麸皮、淀粉、蔗糖、 不同碳源对菌体产酶的影响。由表l可以看出，合成橙皮苷酶和柚苷酶的最适碳源依次 是麸皮葡萄糖淀粉蔗糖玉米淀粉，培养基中添加5％麸皮时，橙皮苷酶和柚苷酶 活力都为最高，分别达到703．4U／ml和680．8U／ml，与其它碳源相比较，具有明显优势， 而且其价廉易得，因此选择麸皮为碳源。 袭1不同碳源对产酶的影响 2．2麸皮加量对产酶的影响 在研究得到麸皮为最佳碳源的基础上，改变培养基中麸皮的添加量，分别添加1％， 2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％的麸皮，其它条件不变，摇床培养后，提取粗酶液，测酶 活，以确定培养基中麸皮的最适浓度。 0 0 O o O 罢 。 O 船 O 避 0 O 知鲫加如∞加如加m O O 图1麸皮加量与产酶活力的关系 图1显示，液态培养基中麸皮含量在1～3％的范围内时，菌体生长较适宜，所产橙皮 苷酶和柚苷酶的酶活都较高，其中橙皮苷酶酶活可达826U／ml，柚苷酶酶活为812U／ml， 与麸皮加量为5％