第25章核苷酸生物合成(刘建华)讲义.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * R1活性中心的二硫键为特定的含有两个SH的蛋白还原。这种蛋白如硫氧还蛋白。经过还原再生有活性的核苷酸还原酶。 ? 为了完成整个还原反应，此过程产生的氧化型硫氧还蛋白必须被NADH还原，此反应为硫氧还蛋白还原酶催化。所以，核苷酸还原的最终还原剂是NADPH。 在其他生物中鉴定出没有酪胺酸自由基的核苷酸还原酶。但是这些酶有其他类型的自由基。例如，有的酶采用的自由基源自腺苷钴胺。 虽然核苷酸还原酶所采用的稳定自由基有差异，但这些酶的活性位点与大肠杆菌核苷酸还原酶相似，作用机制相同(都是基于半胱氨酸自由基特别的反应活性)。因此这些酶的祖先相同，只是为了更好地适应不同的生长条件，采用了不同的稳定自由基。如原型酶易于被氧失活，而近代酶如大肠杆菌的核苷酸还原酶利用氧产生酶蛋白起始的酪氨酸自由基。 核苷酸还原成脱氧核苷酸在化学上是很难进行的化学反应，因此需要一种极其巧妙的催化剂催化。有一种共同的酶催化剂骨架的存在强烈提示，RNA世界之后出现的蛋白质将RNA与DNA连接起来，后者仅作为遗传信息的稳定储存形式。 胸腺嘧啶核苷酸的合成 胸腺嘧啶核苷酸合成酶将脱氧尿嘧啶核苷酸(dUMP)甲基化成胸腺嘧啶核苷酸(TMP)。如同第28章要介绍的，这个核苷酸的甲基化给需要修复的DNA损伤作标记，从而保留DNA的完整性。甲基供体是N5,N10-次甲基四氢叶酸，而不是S-腺苷甲硫氨酸。 胸腺嘧啶核苷酸合成酶将酶蛋白半胱氨酸侧链巯基(-SH)加成到嘧啶环，产生的亲核试剂能够攻击N5,N10-次甲基四氢叶酸的次甲基。这个次甲基因酶蛋白存在发生扭曲，又被活化，有助于含有次甲基的五元环开环。活化的dUMP攻击次甲基，形成新的C-C键。所形成的中间体进一步转化成产物：H负离子自四氢叶酸环转移给次甲基，生成甲基。带有甲基的C原子消除一个质子(交给离去的半胱氨酸残基)，形成胸腺嘧啶核苷酸。四氢叶酸既失去了次甲基，也失去一个H负离子，形成二氢叶酸。为了合成更多胸腺嘧啶核苷酸，必须再生四氢叶酸。 二氢叶酸还原酶催化，再生四氢叶酸。四氢叶酸是一碳单位的载体。嘧啶合成产生的二氢叶酸被还原，再生四氢叶酸。这个过程是二氢叶酸还原酶催化的，还原试剂是NADPH。NADPH烟酰胺环的一个H-直接转移给二氢叶酸的哌啶环。酶蛋白结合的二氢叶酸和NADPH被安置在相邻位置，有助于氢离子转移。 抗癌药物封锁胸腺嘧啶核苷酸合成 快速分裂的细胞需要大量的胸腺嘧啶核苷酸用来合成DNA。抑制TMP合成能够杀死这些细胞。因此，胸苷酸合成酶和二氢叶酸还原酶用作癌症治疗的药物作用靶点。 氟代尿嘧啶是临床使用的癌症化疗药物。在体内，氟代尿嘧啶被转化成氟代脱氧尿嘧啶核苷酸(F-dUMP)。 F-dUMP能不可逆地抑制胸苷酸合成酶活性。由于核苷酸C-5质子的移去是合成TMP所必需的，但是酶蛋白的巯基与次甲基四氢叶酸、F-dUMP形成共价连接物后，没有C-5质子可以移去。这是一种自杀抑制，酶蛋白将底物转化成有抑制活性的试剂，阻止酶蛋白的催化活性。 抑制四氢叶酸的重排也能阻止TMP合成。二氢叶酸的类似物，如methotrexate(氨基蝶呤或甲胺蝶呤)是二氢叶酸还原酶很强的竞争性抑制剂(Ki 1 nM)。甲胺蝶呤在治疗很多快速生长肿瘤方面很有用。这些肿瘤包括急性白血病、绒毛膜癌(choriocarcinoma)、胎盘细胞产生的癌。但甲胺蝶呤杀灭快速生长细胞不分良性和恶性。骨髓干细胞、肠道表皮细胞、发囊细胞也受到这种叶酸拮抗剂损伤，由此产生毒副作用。副作用的表现是免疫功能降低、恶心(nausea)、脱发。 叶酸类似物如甲氧苄啶(trimethoprim)是抗菌、抗原生动物的药物。甲氧苄啶与哺乳动物二氢叶酸还原酶的亲和力比敏感微生物二氢叶酸还原酶的亲和力低105倍。这些酶活性位点裂缝的细微差异能够解释甲氧苄啶高度选择性抗微生物活性。甲氧苄啶和磺胺甲恶唑(sulfamethoxazole，叶酸合成的抑制剂)联合使用，广泛用于感染治疗。 嘧啶生物合成的调节 在第10章我们详细介绍过天冬氨酸转胺甲酰酶。这个酶是细菌合成嘧啶途径的关键调节酶。ATCase受此途径的最终产物CTP抑制，受ATP激活。原核生物和真核生物的胺甲酰磷酸合成酶也是一个反馈抑制位点。 嘌呤核苷酸生物合成的反馈抑制位点有多处 图25.15 嘌呤生物合成的调控反馈抑制控制嘌呤生物合成的总途径，也能控制AMP和GMP的平衡。 (1) 嘌呤核苷酸生物合成决定命运的步骤是PRPP为谷氨酰胺磷酸核糖转氨基