牛MyoG基因启动子序列的克隆与分析.pdf

反刍动物分子遗传与育种m187 牛MyoG基因启动子序列的克隆与分析① 王珊1② 陈宏1，2③ 蔡欣1 ． (1．西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌，712100) (2．徐州师范大学细胞与分子生物学研究所，徐州，221116) down 调控奠定了基础。 关键词：启动子序列；肌细胞生成素基因；分子克隆；牛 族(MRFs)的一员，是肌细胞终末端分化的关键因子，在肌细胞的生成过程中起着中心调控作用，其表 达可以终止成肌细胞的增殖，转入单核成肌细胞融合为多核肌细胞这一过程。作为一种肌细胞特异 肌酸激酶、肌钙蛋白、肌球蛋白轻链基因的表达。因此，MyoG基因的遗传变异被认为与等肌肉的生 成相关，并最终导致产肉量与肉质的变异。1989年，Wright等LIJ首先报道该基因，随后有关该基因的 突变与人类疾病的关系，该基因的表达调控与小鼠、鸡和猪的肌细胞生成机理等的相关研究在国际 上广泛开展，然而到目前为止，关于牛MyoG基因的结构、表达调控及其突变与牛的产肉性状等相关 研究尚属空白。 1材料与方法 1．1材料与试剂 以闽南牛为实验动物，采取其血样，ACD抗凝后带回实验室低温保存。LATaqDNA聚合酶与限制 DH5tt， pGEM—T-easy载体，T4DNA连接酶和x耐购自Promega公司；其他试剂均为国产分析纯。 1．2方法 1．2．1牛基因组DNA的提取牛全血DNA的提取按照Chen[2]等的方法。 ②作者简介：王珊(1980-)，女，新疆乌鲁木齐市人，在读硕士生．专业：动物分子遗传学 net @通讯作者：陈宏0955一)，男，教授．博导，研究方向：分子生物技术与动物育种E-mail：chenhon91212@263 188田中国动物遗传育种研究进展 GAGCAGATGAGAG-3 合成。 1．2．3牛 down MyoG基因启动子序列的touch 0．8nunol／L dNTP，1．5mmol／LMgCl2，10mmol／L 8．3)，50tmnol／L T6s·HCl(pH 06U touchdown Taq酶(‘腿撮a)。反应条件采爿j PCR策略：94％预变性4rain；96 50℃复性lmin，72℃延伸90s，28个循环；最后72℃延伸7miII。 1．2．4 菌株，在LA培养基上培养。挑取白斑在3mlLA培养液中进行译菌落培养，用碱裂解法提取质粒，经sal I酶切与PCR扩增签定重组克隆。 】．2．5 DNA测序与生物信息学分析阳性重组克隆由上海博亚生物技术公司在ABIPRISM 3730测序 NetworkProltroter 多序列比对分析。用Neural 和McPromotcrprediction(http：／／gents．rail 动子。 2结果与分析 2．1牛MyoG基因启动子序列的PCR扩增、T-载体克隆、阳性克隆的鉴定以及测序 doHTl 以MYOGF和MYOGR为引物，通过touchPCR技术扩增，产物经j％琼脂糖凝胶电泳检测到 带回收、纯化后与载体连接。重组质粒经过限制性内切酶salI切割，所释放出的片段大小与预期的 片段，表明蘑组质粒中插入的足目的序列片段(图2)，从阳性重组克隆中提取质粒DNA测序并进行 分析。 图1 touchdown