牛产气荚膜梭菌肠毒血症PCR诊断方法的研究.pdf

牛羊马传染病 2．8药敏试验结果 ， 根据药物敏感性试验确定本次分离到的肺炎链球菌对青霉素G、先锋V、氯霉素、苯唑 青霉素和菌必治等5种药物高度敏感；对氨苄青霉素、新生霉素、 壮观霉素、环丙沙星、 卡那霉素和庆大霉素等6种药物中度敏感；对红霉素、甲氧胺嘧啶、乙酰螺旋霉素、林可 霉素和链霉素等6药物具有耐药性。 2．8动物实验结果 试验组小白鼠在24h内全部死亡，死亡的小白鼠脏器都有出血点，并从死亡小白鼠脏 器内分离到注射的相应细菌。对照组未见异常。 3小结与讨论 3．1 通过流行病学调查、临床症状、病理变化、病原分离鉴定和动物实验，确定该成 年澳大利亚奶牛死亡是肺炎链球菌感染造成败血症所致。 3．2 当前我国奶牛集约化养殖方式迅速发展，百头或者千头以上的奶牛场越来越多， 伴随着养殖规模不断扩大，一些新病不断出现，一些不常发生的传染病也有日益增加的趋势。 通过对本次奶牛肺炎链球茵病诊断发现，传统上认为对犊牛易感的肺炎链球菌对成年奶牛也 发生了感染。这可能是由于围产期母牛机体抵抗力下降，再加分娩应激对机体的影响更大， 从而为肺炎链球菌侵入、繁殖及发病提供了有利条件。肖定汉报道以奶牛场爆发临产和产后 奶牛患巴氏杆菌病【4】。以及作者发现的产后奶牛肺炎克雷伯氏菌病和大肠杆菌与溶血性曼 氏杆菌混合感染等病例。说明临产和产后奶牛容易激发一些条件性病原茵感染，所以在奶牛 生产实践中我们应该更加重视对围产期和产后奶牛的饲养管理，尽量减少经济损失。 3。3通过药物敏感性实验发现该菌株对头孢类和青霉素类药物比较敏感，而对红霉素、 甲氧胺嘧啶和乙酰螺旋霉素等药物具有耐药性，供临床参考。 参考文献略 牛产气荚膜梭菌肠毒血症PCR诊断方法的研究 倪宏波朴范泽 朱战波候喜林吴凌 (黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319) 摘要：产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病的病原体，给养殖业造成巨大的经济损失．本次实验在可 疑患牛病料中分离到三株A型产气荚膜梭菌。由于常规诊断方法存在诸多弊端，且费时费事，因此本实验 采用实验室诊断方法同时结合PCR方法进行病原菌鉴定，结果表明该方法能扩增出324bp的功能基因，具 有较高的准确性、敏感性和时效性。 关键词：牛；产气荚膜梭菌：PCR 产气荚膜梭菌在自然界分布很广，如饮水、大气、土壤、动物肠道中。当饲养条件突然 改变时，动物就会迅速发病死亡。该菌为革兰氏阳性菌，专性厌氧，根据其产生的毒素不同 分为5个血清型，即A、B、C、D、E型，不同菌型可引起动物不同的疾病。该菌主要通过 产生一系列的毒力因子(外毒素)引起宿主的各种疾病【l。2】。 本实验的病料分别取白宝泉岭新华农场某队和二九一农场某队可疑奶牛，临床表现突然 发病，食欲减退，反刍停止：死亡牛剖检可见心脏表面刷状出血，肝脏肿大，前胃粘膜易脱 落，有点状和片状出血。真胃粘膜水肿、脱落或有弥漫性出血，脾肿胀不明显，被膜下或边 缘部有出血点，肠管外观里暗红色，内容物呈西红柿酱样，肠黏膜严重出血。根据流行病学 调查和实验室检查，诊断为由产气英膜梭菌引起的肠毒血症。现将诊断结果报告如下： 1材料与方法 1．1实验材料 ．．562． 第六属理事会第二次会议暨教学专业安员会2006年会议论文集 绵羊血琼脂平板、肉肝胃膜消化汤、抗梭菌毒素均由微生物实验室自制；小白鼠购于牡 丹江医学院实验动物中心；PCR反应所用试剂购于长春克隆生物试剂有限公司；引物由上 海生工生物技术服务公司合成。 ‘ 1．2菌株 药监察所微生物室。 1．3引物 参考Saito和Fach等所报道的引物序列[3-43根据已经发表的文献资料，设计了5对引 物，引物序列如下： AATGTTACTGCCGTTGA-3’ cpa．5-GCT 5’．CCTCTGATACATCGTGl’AAG。3 AATATGCTGAATCATCTA·3’ cpb：5-GCG 5’．GCAGGAACATTTAGTATATCTTC．3。 e