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用微流控分析芯片研究黄山松随机扩增DNA多态性片断 刘金华 殷学锋 唐娟娟 (浙江大学化学系微分析系统研究所 杭州中国) 随机扩增DNA多态性(简称RAPD)可快速提供联锁信尉¨J，在建立针叶树类基因图 谱中应用较多IjJ。平板凝胶电泳是常用的分析方法。但它只能得到一些有关RAPD片断的半 定量信息，在鉴别黄山松等多态性较弱的样本时受到限制。本文首次运用微流控芯片分析系 统(2100 Bioanalyzer)结合t一检验成功地对黄山松多态性RAPD片断进行分析。 从6粒单株黄山松18×28的种子(仙居县的18优树与磐黄县的28优树交配所得)胚乳 组织中提取DNA，作为RAPD扩增模板。RAPD扩增时。模板浓度为7．8 nV20皿，双引物为 ℃40秒，72℃2分钟35循环次后再进行72℃7分钟的后延伸。扩增产物分别用凝胶电泳 和微流控芯片分析系统141进行分析。芯片分析的进样量比琼脂糖凝胶电泳少15倍，整个分析 时间只需20min，比琼脂糖凝胶电泳(1．5h)要少得多。分析结果(图1)表明，芯片分析系 统可以提供高效毛细管电泳分离。从图1样品6可以计算得到理论塔板数高达85030(701bp)， 因此得到的DNA片断的峰很窄：再通过在LadderDNA和样品中加入上标10380bp和下标50 bp的Marker作为内标，可以消除仪器运行过程中DNA条带漂移所带来片段大小误差，从而 可以得到多态RAPD片段的大小和浓度的定量信息。 ．qto誊毫-盛 ．qg：毽-譬 ●．●I，●●●．●● 1．i≈ ．g冀．{ *‘．*x^*^t‘， ．g-_i§盛 Ient2100生化分析仪分析6个R^阳样品的电泳田 Fig．1．Agj 从图1可知，样品2的电泳图中只有一个DNA片断峰(712bp)，而其他5个样品中都有2 个DNA片断峰；样品6的电泳图中的301的DNA片断峰，在另外4个样品没有出现，而在 2100生化分析仪的数据处理软 1056-1083bp相邻范围内各出现了一个DNA片断峰。Agilent 件可以自动计算电泳图中DNA片峰所对应的DNA片断大小(bp)和浓度，由此得到的6个样 品RAPD的片断大小(bp)和浓度汇总于Tab．1．