一种磨砂玻璃作为细菌载体进行扫描电镜观察的方法.pdfVIP

第３４卷第４期 电 子 显 微 学 报 Ｖｏｌ??３４，Ｎｏ??４ ２０１５年８月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＥｌｅｃｔｒｏｎＭｉｃｒｏｓｃｏｐｙＳｏｃｉｅｔｙ ２０１５０８ 文章编号２０１５ 一种磨砂玻璃作为细菌载体进行扫描电镜观察的方法 * ２ 孙会忠 ，宋月芹 ，王小东 ，朱金峰 ，侯小改 （１． 河南科技大学农学院，河南洛阳４７１００３；２． 河南省烟草公司漯河市分公司，河南漯河４６２０００） 摘 要：通过对多种细菌材料的超微形态观察实验，优化出一种以磨砂玻璃作为黏附载体对细菌进行扫描电镜观 察的新方法。 该方法主要包括收集菌体、二重漂洗、加压黏附、固定、脱水、置换、临界点干燥、粘台、离子溅射和观 察等步骤，创新点集中体现在采用磨砂玻璃作为黏附菌体的载体，同时，通过离心加压的方法提高菌体对玻璃表面 黏附的牢固性。 该方法可操作性强，实际观察效果优良，稳定性好，具有一定的借鉴意义。 关键词：磨砂玻璃；细菌；制样方法；扫描电镜 中图分类号：Ｑ３３６；Ｑ９３３ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０??３９６９／ｊ?２０１５??０４??０１４ 在微生物学科的显微观测实验中，扫描电镜 １??３ 方法与步骤 （ｓｃａｎｎｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ＳＥＭ）已得到极为广 将细菌材料经液体摇床培养或固体平板划线培 泛的应用［１～３］ 不同生物材料超微结构扫描电镜观 养２４ｈ左右，获取旺盛生长的菌体材料 察成败的关键取决于样品的制备方法，细菌作为一 （１）收集菌体：取培养好的菌液 １０ｍＬ，移入 １０ 类个体微小的生物体，超微形态特征的客观体现在 ｍＬ无菌离心管，６０００～８０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃 菌株的多项分类、发育生物学等研究方面尤为重要 上清，留沉淀菌体 文献报道的细菌电镜观察方法有多种［ ～６］ ，一种好 （２）二重漂洗：向菌体沉淀加入５ｍＬｐＨ７??２， 的方法可以大大提高实验效率，减少耗材浪费，节约 ０??０２ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液悬浮漂洗 １０ｍｉｎ，离心（条 时间［７］ 作者通过对多种细菌材料的扫描电镜观 件同前文，下同），再加入５ｍＬ无菌水漂洗５ｍｉｎ， 察研究实践，优化总结出了一套用磨砂玻璃作为菌 离心，重复进行一次，最后用 １??５ｍＬ无菌水悬浮菌 体黏附载体的观察新方法 体 得到干净的菌悬液 如果是固体平板划线培养的细菌材料，则向平 １ 材料和方法 板中加入５ｍＬ无菌水，并用无菌棉签将菌苔轻轻刮 １．１ 实验材料 下，之后用移液器将菌液移入离心管，其它步骤同菌 细菌材料：鞘氨醇单胞菌属 （Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ 液材料的处理 ｓｐ．）；节杆菌属 （Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）；葡萄球菌属 （３）加压粘附：将经过二重漂洗的菌悬液移入 ２ （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）；根瘤菌属（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．）；微 １??５ｍＬ或２ｍＬ无菌离心管，同时将５～７ｍｍ 磨砂 杆菌属（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．）；勒克菌属（Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ 玻璃小块放入离心管（注意磨砂面朝上），离心，弃 ｓｐ．），菌种保存于河南科技大学微生物平台实验室 上清 载体材料：磨砂玻璃（选用磨砂载玻片的磨砂