基因表达检测RT—PCR.pptVIP

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2017-03-27 发布于四川
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基因表达检测RT—PCR.ppt

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基因表达检测RT—PCR

操作步骤（一） RNA Preparation Prepare the plant total RNA by TRIzol Reagent. Dilute the Total RNA to the final concentration of 1 ?g / ?l by DU640. . Combine the following in a 0.5 ml sterile eppendorf tube: Total RNA 3?l (2-5?g) RNase-free DNase ? １?l (１u / ?l) 10× DNase ? buffer 1 ?l add DEPC-treated ddH2O 5 ?l Incubate at 37℃ for 15 min, then 70℃ for 10 min. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 操作步骤（二）Reverse Transcriptase Reaction Add 1 ?l 500 ?g / ml oligo (dT) 15 primer, mix the contents of the tube by gently vortexing and collect the reaction by brief centrifugation. Heat the mixture at 70℃ dry bath for 10 minutes, then put on ice for 5 minutes. Add the following contents: 5 × first strand buffer 4 ?l RRI 1 ?l 10 mM dNTP 1 ? l M-MLV (200 U / ?l) 1 ?l DEPC H2O 2 ?l Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 操作步骤（二） 4. incubate at 37℃ for 1 h. (The total volume should now be 20 ?l) 5. Inactive the reaction by heating at 70℃ for 15 min, then add 20 ?l ddH2O and the first strand of cDNA can be used as a template to amplification in PCR. 6. To remove the RNA complementary to the cDNA, add 1 ?l (2 units) of RNase H and incubate at 37℃ for 20 min. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. PCR技术 PCR（多聚酶链式反应〕是一种体外扩增特异DNA片段的技术，是分子克隆技术中最常用的技术之一，是在模板DNA、引物和dNTPs的存在下依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板结合的特异性。反应分为变性（denaturation，）退火（annealing）、延伸（extension）三步，经过一定的循环，介于两个引物之间的特异DNA片段得到大量扩增。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. The Invention of PCR Invented by Kary Mullis in 1983. First published account appeared in 1985. Awarded