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使用快速高分离度体积排阻色谱柱分析 生物治 药物中的聚集体 应用简报 生物制剂与生物仿制药 作者 前言 Andrew Coffey 由于聚集体会对药物安全性产生显著影响并且可能引发抗原反应，因此蛋白质聚集是生 安捷伦科技有限公司 物治疗药物蛋白质的关键质量属性 。聚集体还可能会降低生物治疗药物的药效并大幅 [1] 降低生产工艺的经济效益。蛋白质通常在暴露于压力条件下时发生聚集，例如 、温度 pH 或浓度的变化，因此不同生产阶段均有可能发生聚集。目前人们已经确定选择体积排阻 色谱(SEC) 方法进行聚集体的定量分析。 在生物治疗药物开发过程中 （例如在克隆选择过程中或在通过严格的 “实验设计”法优 化发酵条件时）监视聚集体的形成情况，这些过程可能产生大量需要进行体积排阻分析 的样品。 SEC 常用条件的分析时间往往需要20 min 甚至更长，这极大限制了对大量样品的分析能 力。Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱具有高度优化的粒径和孔径设计，可实现更快速的 分离，从而显著减少分析瓶颈问题。本应用简报介绍的技术可提高样品通量而不影响分 析的准确性。 材料与方法 结果与讨论 试剂、样品与材料 AdvanceBio SEC 色谱柱的2.7 μm 颗粒专为实现最高柱效而设计， 可避免样品出现剪切降解的风险，并且颗粒间不会出现堵塞。独特 免疫球蛋白G (IgG) 购自Sigma-A ldrich 公司。蛋白质混标购自 的制造方法控制了孔径和结构以及孔隙体积。使用亲水聚合物层可 Bio-Rad Laboratories, Inc.。蛋白质混标的组分为甲状腺球蛋白 确保蛋白质峰尖锐且分离度良好。图 展示了使用 1 AdvanceBio 、 球蛋白 、卵清蛋白 、肌红蛋白 (670 KDa) g- (158 KDa) (44 KDa) (17 KDa) 和维生素 B12 (1.35 KDa)。所有化学品和溶剂均为 SEC 色谱柱与其他供应商的相同规格 (7.8 ×300 mm) 色谱柱对 蛋白质标准品进行 SEC 分离所得的色谱图比对结果。与