4普通光学显微镜的使用及微生物的简单染色教案.ppt

实验四、普通光学显微镜的使用及微生物的简单染色 实验目的： 1.学习普通光学显微镜的构造和功能；2.学习微生物的简单染色，观察细菌的形态。 实验材料： 显微镜 载玻片 香柏油 擦镜纸 双层瓶 染色剂 滴管 菌液 普通光学显微镜的构造及原理 四、油镜的原理： 放大倍数可100倍之大，焦距很短，光强度最大。 油=1.52（香柏油） 介质折射率 水=1.33 空气=1 玻璃=1.55 香柏油对光的折射率与玻璃相似，光线直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不但增加了照明度，而且使油镜的数值孔径增加，用NA表示，一般在1.2—1.4。低高倍镜头等干镜NA都低于1.0。若以可见光的平均波长为0.55μm来计算，数值孔径通常在0.65的高倍镜只能分辨出距离不小于0.4μm的物体而油镜的分辨率却可达到0.2μm左右。可见显微镜的放大效能是由数值孔径决定的。 显微镜使用的主要步骤： 　取镜→检查对光→夹片→低倍物镜→调光、调焦→找目标，移中央→换高倍→找目标→教师评分→清洁→还镜。 显微镜用毕后的处理 拔掉电源插头 下降载物台 取干净擦镜纸拭去镜头上的香柏油 取干净擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹 取干净擦镜纸擦去残留的二甲苯 将显微镜的各部位还原，物镜转成“八”字形，擦干净镜体，罩上防尘罩。 实验任务： 1、每个同学自己动手单染三张片子进 行观察。其中老师检查一片。 返回 实验步骤 1、涂片 左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中取菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜; 从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于预先滴有的一滴自来水地玻片上; 2、干燥 在空气中自然干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行). 3、热固定 用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜. 4、染色 在固定好的菌膜上滴加美兰染色剂，染色剂量以刚好盖住菌膜为宜，染色1min. 5、水洗 倒去染液，用自来水沿玻片一端冲洗，直至流下的水无色为止。 6、干燥 用吸水纸吸干 7、镜检 七、实验报告要求： 1、根据观察的球，杆菌的观察实况画示意图，各一图。 2、用油镜观察时，为什么要求载玻片上加香柏油？ 3、思考题(4)影响显微镜分辨率的因素有哪些？ ※ 每个同学将自己制片的观察结果，报告老师，经检查合格登记，在课堂记录册上。 八、下次实验： 微生物的革兰氏染色 ?请大家做好预习。 * * 光学 部分 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、调节器等 光源、物镜、目镜、聚光器及虹彩光圈等 机械 部分 普通光学显微镜 为光学部分 目镜 物镜 调焦螺旋 推进器 调光螺旋 电源开关 聚光器和虹彩光圈 载物台 光源 物镜 放大倍数： 4×:低倍 10×:低倍 40×:高倍 100×:油镜 目镜 放大倍数： 10× 15 × 物镜转换器 显微镜 放大倍数 目镜 放大倍数 物镜 放大倍数 ＝ × 显微镜使用总原则： 先低倍后高倍 先粗调后微调 放大倍数： 10× 15 × 放大倍数： 4×:低倍 10×:低倍 40×:高倍 100×:油镜 油镜的使用原理 透镜 光线 加油前 玻 片 光线 香柏油或液体石蜡 加油后 透镜 玻 片 分辨率（最大可分辨距离）= ?/2NA *