选修三_专题一_基因工程的操作工具精选.ppt

生物 选修3现代生物科技专题 目 录 专题1 基因工程 专题2 细胞工程 专题3 胚胎工程 专题4 生物技术的安全性和伦理问题 专题5 生态工程 专题1 基因工程 再 基因工程的概念 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 →拼接 →导入 →表达 基因重组 基因工程的概念 转基因抗虫棉花 转入苏云金杆菌的一个抗虫基因，是中国目前最主要的转基因作物。 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 1.1 DNA重组技术的基本工具 基本工具： 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 粘性末端 平末端 限制性核酸内切酶 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 限制酶 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 什么叫黏性末端？ 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 用同一种限制性酶处理不同DNA片段，会形成同样的黏性末端，可进行重组。 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶是原核生物的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，使之失效，达到保证自身的安全的目的。 限制酶在原核生物中的作用是什么？ 因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解；含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 为什么细菌中限制酶不剪切本身的DNA？ E·coli DNA 连接酶 T4 DNA 连接酶 DNA连接酶 区别： E·coli DNA 连接酶 只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接 T4 DNA 连接酶 既可“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低 DNA连接酶 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ 相同点： 两者都是形成磷酸二酯键。 不同点： DNA连接酶:是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板。 DNA聚合酶:是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接到正在合成的DNA单链中，形成一条与模板链互补的DNA链； 作用部位： 磷酸二酯键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 DNA连接酶 DNA聚合酶:是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接到正在合成的DNA单链中，形成一条与模板链互补的DNA链； 基因进入受体细胞的运载体 常用运载体：质粒、 噬菌体、 动植物病毒 质粒 存在：主要存在于细菌的染色体以外。 特性：是很小的环状DNA分子，在细胞染色体外能够自我复制。 大肠杆菌质粒的分子结构示意图 作为运载体的条件： （1）必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到运载体上去。 （2）必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （3）必需带有标记基因，以便重组后进行重组DNA分子的辨认和筛选。 课本知识回顾 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加 以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 基因拼接技术