生理学实验设计.docxVIP

实验设计 影响骨骼肌收缩的因素 [实验原理] 蛙类的一些生理活动规律与温血动物相似，而维持其离体组织正常活动所需的理化条件较简单，易于建立和控制。坐骨神经和腓肠肌是可兴奋组织，将其置于人工配置的任氏液中，兴奋性在几小时内可保持不变。因此在实验中常用蛙类的坐骨神经-腓肠肌标本来观察和研究兴奋、兴奋性、刺激与肌肉收缩等基本的生理现象和过程。 神经受到一次阈刺激或阈上刺激，先产生一次动作电位，通过神经-肌肉接头处兴奋的传递，引起受支配的骨骼肌产生动作电位，然后通过兴奋-收缩耦联机制引起骨骼肌收缩。在一定范围内，随着刺激强度的增加，骨骼肌的收缩强度也随着增加。 整块骨骼肌或单个肌细胞受到一次短暂而有效的刺激时，可产生一次机械收缩，称为单收缩。若给肌肉相继两个有效刺激，且使两个刺激的间隔时间小于该肌肉单收缩的总时程。则引起肌肉的收缩可以总和起来，出现一连续的收缩，称为复合收缩。当骨骼肌受一串有效刺激时，若刺激频率较低，则肌肉的反应表现为一连串单收缩，若刺激频率逐渐增加，肌肉收缩反应可表现为不完全强直收缩和完全强直收缩 [实验对象] 蟾蜍或蛙。 [实验药品与器材] 青蛙或蟾蜍、常用手术器械（包括粗剪刀、手术剪、手术镊、眼科剪、眼科镊、金属探针、玻璃分针）、固定针、锌铜弓、蜡盘、培养皿、污物缸、棉线、纱布、滴管、任氏液 RM6240计算机采集系统、JZ100型张力换能器(50 g)、支架、一维位移微调器、肌槽、双针型露丝电极 [实验方法与步骤] 1. 制备蛙的坐骨神经—腓肠肌标本 1) 毁脑和脊髓 取青蛙一只，用纱布包裹青蛙的四肢和躯干，露出头部。用左手握住青蛙，并用食指压其头部前端使其尽量前俯，拇指按压背部，使头部前俯；右手持金属探针由头前端沿中线向尾方划触，触及凹陷处即枕骨大孔处转向头方，向前探入颅腔内，然后向各个方向搅动探针，以捣毁脑组织。如探针确实在颅腔内，可感觉出针在四面皆壁的腔内。脑组织捣毁后，将探针退出，再由枕骨大孔刺入,并转向尾方,与脊髓平行刺入椎管,以确坏脊髓，要确定脑和脊髓是否完全破坏，可检查动物四肢肌肉的紧张性是否完全消失。 2) 剥制后肢标本 自青蛙的两侧腋部以下完全剥离皮肤（注意：可事先剪去尾椎末端及汇殖腔附近的皮肤，使剥离更容易）。而后倒提蛙腿，使其头部向下，用手术剪横向剪开腹部肌肉，看清脊神经后,用粗剪刀剪断脊柱(注意铁损伤坐骨神经)。把标本浸泡于盛有任氏液的培养皿中，将手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械洗净，再继续下面的步骤。 3) 制备坐骨神经腓肠肌标本 游离坐骨神经。取其中的一支蛙腿，将标本仰卧位置于蜡盘上，使其充分伸展呈人字形，用三根大头针将标本钉在蜡盘上。然后再用玻璃分针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经大腿部分，直至分离至腘窝胫腓神经分叉处，然后剪断二头肌，半腱肌和半膜肌肌腱，并绕至前方剪断股四头肌腱。自上而下剪断所有坐骨神经分支，将连着3～4节椎骨的坐骨神经分离出来。 4) 分离腓肠肌 用玻璃分针或镊子分离腓肠肌和跟腱，并穿针结扎。在结扎远端用粗剪刀剪断跟腱，左手执线提起腓肠肌，用手术剪减去其周围联系的组织，但保留腓肠肌起始点与骨的联系，注意切勿损伤支配该肌的神经分支。 5) 完成坐骨神经腓肠肌标本 将已经游离的坐骨神经搭在腓肠肌上。用粗剪刀自膝关节周围向上剪除并刮干净所有大腿肌肉，在距膝关节约1 cm处剪断股骨。弃去上段股骨，保留部分即坐骨神经—腓肠肌标本。将标本放在盛有新鲜任氏液的培养皿中待用。 6) 标本活性检验 用手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，再用经任氏液润湿的锌铜弓刺激神经。若腓肠肌迅速发生收缩反应，说明标本机能良好，制备成功。应及时移至盛有任氏液的培养皿中，供实验所用。 1. 固定标本并连接装置 1) 将坐骨神经腓肠肌标本所带的股骨断端固定于肌槽的骨头固定孔内。 2) 腓肠肌肌腱上的扎线和张力换能器金属弹性梁臂上相连。 3) 然后将标本的坐骨神经干搭在肌槽的电极上，电极接头与一根与刺激输出线相接，传导刺激信号，另一根与输入线相接，通入输入信号采集装置，记录神经电位。 4) 利用一维位移微调器调节扎线的张力，不可过松或过紧，使肌肉自然拉平为宜。（保证肌肉一旦收缩，即可牵动张力换能器的金属弹性梁）。 5) 将双针形露丝电极置于腓肠肌表面，通过信号输入线接通入肌电信号通道。 6) 完成装置，整体效果如图1所示。在记录肌肉收缩与神经电位、肌电的时相性关系时，肌电电极和神经电极都需输入信号采集器，记录刺激强度和频率对肌肉收缩的影响时，上述两电极不必接入信号采集器。 2. 实验观察记录与探究 1) 骨骼肌电兴奋与收缩的时相关系探究 a)固定蛙的腓肠肌标本后，连接好仪器，打开计算机信号采集系统，开始实验。 b) 选择单刺激，调节刺激强度为阈上强度，扫描速度一致